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8.1.2
Extracción de ADN
La extracción de ADN no forma parte del procedimiento de uso del equipo de ensayo PapilloCheck
La extracción de ADN antes del análisis PapilloCheck
de ADN oCheck
, también suministrado por Greiner Bio-One (consulte la información sobre pedidos
®
en el capítulo 2). Siga con cuidado las instrucciones de uso cuando utilice el equipo de extracción
de ADN oCheck
.
®
Para la extracción de ADN con el equipo de extracción de ADN oCheck
de solución de muestra.
Las muestras de citologías cervicouterinas humanas que se tomen
• con el equipo de toma de muestras PapilloCheck
• en medio de toma de muestras PreservCyt
• en Easyfix (VWR, Radnor, PA, EE. UU.) o
• Cyt-ALL (Alphapath, Mudaison, Francia)
se pueden procesar directamente.
Las muestras de citologías cervicouterinas que se tomen en
• El medio de toma de muestras Surepath™ (BD, Franklin Lakes, NJ, EE. UU.) se debe lavar antes de su
uso: centrifugue 250 µl de la muestra durante 5 minutos a 11 000 x g y resuspenda el pellet en 250 µl de
agua destilada. Después, se pueden procesar los 250 µl con el equipo de extracción de ADN oCheck
Las muestras de citologías cervicouterinas que se tomen en
• El medio de toma de muestras STM™ (Qiagen, Hilden, Alemania) se debe diluir: use 100 µl de la
muestra y añada 150 µl de agua destilada. Después, los 250 µl de la muestra diluida se pueden
procesar con el equipo de extracción de ADN oCheck
En general, si la muestra de la citología cervicouterina parece estar muy concentrada y ya agregada,
es necesario diluir y homogeneizar la muestra antes de comenzar el proceso de extracción de ADN.
Las muestras tomadas del cuello uterino que estén excesivamente diluidas y sin células visibles se
deben concentrar con el fin de aumentar el rendimiento celular de la extracción de ADN: centrifugue un
máximo de 1000 µl de la muestra durante 5 minutos a 11 000 x g y resuspenda el pellet en 250 µl de
agua destilada. Después, se pueden procesar los 250 µl con el equipo de extracción de ADN oCheck
Este paso de concentración solo es adecuado para las muestras de citología cervicouterina que se tomaron
!
con el equipo de toma de muestras PapilloCheck
Cyt-All o en el medio de toma de muestras Surepath™. Si se utilizó el medio de toma de muestras STM™, la
concentración se puede realizar mediante centrifugado.
8.2
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
La PCR es un método muy sensible que puede detectar cantidades extremadamente reducidas de
ADN. Se deben extremar las precauciones para evitar la contaminación de la reacción (consulte el
capítulo 7). Se requieren polimerasa HotStarTaq
con el equipo de ensayo PapilloCheck
!
El equipo de ensayo PapilloCheck
de Thermo Scientific (consulte el capítulo 2). Es obligatorio usar estas enzimas para lograr el rendimiento previsto.
Manual de instrucciones de PapilloCheck
Revisión: BQ-708-00 / Octubre de 2017
®
®
(Hologic, Bedford, MA, EE. UU.)
®
, en el medio de toma de muestras PreservCyt
®
y uracil-N-glucosilasa, las cuales no se suministran
®
y deben adquirirse por separado (consulte el capítulo 2).
®
se ha validado con polimerasa HotStarTaq
®
y PapilloCheck
high-risk
®
®
se debe realizar con el equipo de extracción
, se deben utilizar 250 µl
®
(Greiner Bio-One, Frickenhausen, Alemania)
.
®
de Qiagen y uracil-N-glucosilasa
®
.
®
.
®
.
®
, Easyfix y
®
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