Medición de la fluorescencia
Para medir la fluorescencia en la cubeta de flujo, el detector tiene que
equilibrar la necesidad de buscar una alta selectividad (para distinguir
longitudes de onda de fluorescencia muy específicas) con la necesidad de tener
una alta sensibilidad (para medir intensidades bajas de fluorescencia).
Cuantificación
La fluorescencia es lineal a concentraciones bajas, pero puede dejar de serlo a
concentraciones altas.
Selección de la longitud de onda de emisión
Un monocromador selecciona la longitud de onda de emisión.
Tubo fotomultiplicador
El tubo fotomultiplicador (PMT) produce una corriente proporcional al flujo
de fotones emitidos por las moléculas en la cubeta de flujo.
Barrido
Los detectores equipados con monocromadores de excitación y emisión pueden
hacer fácilmente un barrido de varias longitudes de onda de excitación o
emisión. Cambiar la longitud de onda implica cambiar también la
configuración del monocromador. Durante un barrido, la configuración de un
monocromador se mantiene constante mientras el otro monocromador barre
varias longitudes de onda.
Funcionamiento multicanal
Los detectores equipados con monocromadores de excitación y emisión pueden
cambiar la longitud de onda de las configuraciones de excitación y emisión. En
funcionamiento multicanal, los dos monocromadores se mueven rápidamente
entre los pares de longitudes de onda seleccionados para producir múltiples
trazados de cromatogramas. Múltiples salidas de señales pueden entonces
proporcionar información adicional a partir de una única separación.
Medición de la fluorescencia
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