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utilizará 100 ml de solución de agarosa.
3. Prepare 500 ml de tampón de electroforesis 1X TAE o 1X TBE
(véase a continuación).
Tampones de electroforesis
Los dos tampones que más comúnmente se utilizan para la
electroforesis horizontal de ADN de doble cadena en geles de
agarosa son Tris-acetato-EDTA (TAE) y Tris-borato-EDTA
(TBE). Aunque las potencias de resolución de estos tampones
son muy similares, las capacidades tamponadoras relativas son
muy distintas, y confieren diferentes atributos al ciclo que se
resumen a continuación:
TAE: Tradicionalmente el Tris acetato ha sido el tampón que
más se ha empleado. Sin embargo, su relativamente
baja capacidad tamponadora se agotará durante una
electroforesis extendida, por lo que se necesita recircular
el tampón en ciclos de más de 140 mA-horas. Entre las
ventajas potenciales de usar el tampón TAE frente al
tampón TBE se incluyen mayor resolución superior del
ADN superhelicoidal y una migración aproximadamente
10 % más rápida de los fragmentos de ADN lineal de
doble cadena
TBE: La significativamente mayor capacidad tamponadora del
Tris-borato y su relativamente bajo consumo de corriente
elimina la necesidad de recirculación en todos los ciclos,
a excepción de los de más duración (> 300 mA-horas).
Los sistemas de tampón TBE no se recomiendan cuando
después de la electroforesis se vayan a recuperar los
fragmentos a partir del gel.
4. Añada bromuro de etidio al tampón de electroforesis diluido a
una concentración final de 0,5 µg/ml.
NOTA:
La incorporación de bromuro de etidio tanto al gel como al
tampón de migración tendrá como resultado máximos
niveles de detección, y proporcionará elevados niveles de
fluorescencia de la muestra y un nivel uniformemente bajo
de fondo.
Añada 6,6 ml del tampón de electroforesis 1X que contiene
5.
etidio que se ha elaborado en el paso 4 por cada milímetro de
espesor de gel que se desee, hasta un máximo de 100 ml, al
matraz que contiene la agarosa. Una solución de gel 100 ml
creará un gel con un espesor de 7,6 mm. Se pueden hacer
(1)
.
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