Qiagen Rotor-Gene Q MDx Manual Del Usuario página 60

Disociación de alta resolución
El análisis de disociación de alta resolución (High Resolution Melt, HRM) caracteriza las muestras
de ADN bicatenario a partir de su comportamiento de fusión (disociación). Es similar al análisis
clásico de curva de disociación, pero proporciona mucha más información para una gama más
amplia de aplicaciones. Las muestras se pueden discriminar en función de la secuencia, la longitud,
el contenido de GC o la complementariedad de la cadena, e incluso según los cambios de un solo
par de bases.
El análisis de HRM solo se puede llevar a cabo en instrumentos que tengan instalado hardware y
software de HRM. Los datos se adquieren utilizando fuentes y detectores de HRM especializados.
Los análisis de HRM también incluyen la opción de efectuar una optimización de ganancia justo
antes de que se inicie la disociación. Una vez que se ha realizado la HRM, los datos pueden
analizarse con el software de análisis de HRM (apartado 10).
Ciclado de desnaturalización óptica
El ciclado de desnaturalización óptica es una técnica de excitación, disponible en el instrumento
Rotor-Gene Q MDx, que realiza análisis de disociación en tiempo real para determinar el pico de
disociación de una muestra de referencia. De este modo, la desnaturalización del producto de la
PCR se indica con mayor precisión que configurando una temperatura de desnaturalización
determinada para un tiempo de retención. Para llevar a cabo esta técnica, basta con colocar un
tubo de referencia de producto de la PCR en la posición del tubo 1 del rotor. El tubo de referencia
también debe incluir una sustancia química de detección que permita detectar la disociación de la
cadena.
Cuando se calienta a la temperatura de desnaturalización inicial, en el canal verde se realiza una
disociación de 80 °C a 95 °C de forma predeterminada. El usuario puede ajustar los parámetros
de esta disociación inicial. A partir de estos datos, se genera una curva de disociación que se
analiza automáticamente.
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0,75
0,25
El pico de disociación toma como referencia los datos sin procesar para obtener un umbral de
desnaturalización. A continuación, en cada paso del ciclado de desnaturalización óptica, el
instrumento se calienta lo más rápidamente posible y los datos se adquieren de forma continua.
Manual del usuario de Rotor-Gene Q MDx CE 02/2022
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