Qiagen Rotor-Gene Q MDx Manual Del Usuario página 96

Por ejemplo:
No es posible obtener un intervalo de confianza del 95 % a partir de un conjunto de

concentraciones calculadas seleccionadas porque el modelo de regresión también debe tenerse
en cuenta.
En las concentraciones calculadas, en lugar de un valor absoluto, se indica la desviación

estándar "Orders of Magnitude" (Órdenes de magnitud). Se trata de una variación del
porcentaje. Por ejemplo, un valor de 1,07537 representa una variación del 7,54 %
(278 974 – 322 611) = (300 000/1,07537 – 300 000 * 1,07537).
absoluto no tiene ningún sentido en el caso de una curva estándar. El valor podría indicarse a
la concentración más baja para crear un error percibido como bajo (±3 copias) o a la
concentración alta (±3 000 000 copias). Por este motivo, se indica la desviación estándar
"Orders of Magnitude" (Órdenes de magnitud).
En las concentraciones calculadas, se utiliza la media geométrica en lugar de la media

aritmética. Esto responde a la naturaleza exponencial de la real-time PCR. Por ejemplo, en el
caso de las diluciones dobles con 1, 2, 8 y 16 copias, el promedio debe ser de 4 copias, que
es la mitad de la serie de diluciones. Sin embargo, la media aritmética es 6,75. La media
geométrica es (1 * 2 * 8 * 16)^(1/4) = 4 copias.
Normalización del tubo dinámico
La opción Dynamic Tube (Tubo dinámico) aparece seleccionada de forma predeterminada y se
utiliza para determinar el promedio de fondo de cada muestra justo antes del inicio de la
amplificación.
La normalización estándar simplemente toma los 5 primeros ciclos y los utiliza como indicador del
nivel de fondo de cada muestra. A continuación, todos los puntos de datos de la muestra se dividen
entre ese valor para normalizar los datos. Este método puede resultar impreciso porque es posible
que, para algunas muestras, el nivel de fondo de los 5 primeros ciclos no sea indicativo del nivel
de fondo que se da justo antes de la amplificación. En cambio, la normalización del tubo dinámico
utiliza la segunda derivada de cada trazado de muestra para determinar un punto de inicio para
cada muestra. Después, se realiza el promedio del nivel de fondo desde el ciclo 1 hasta este
número de ciclo de inicio para cada muestra. De esta forma, se obtienen los resultados de
cuantificación más precisos.
Tenga en cuenta que, para algunos conjuntos de datos, la fluorescencia del fondo no es sistemática
durante los ciclos antes del inicio de la amplificación. En estos casos, puede ser necesario
desactivar la normalización del tubo dinámico haciendo clic en Dynamic tube (Tubo dinámico), ya
que podría conllevar una cuantificación menos precisa.
Manual del usuario de Rotor-Gene Q MDx CE 02/2022
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