Normas Básicas Para Evitar Contaminaciones; Recogida Y Transporte De Las Muestras; Extracción Del Material Genético - INGENASA INgene q IBV SYBR Instrucciones De Uso

5. NORMAS BÁSICAS PARA EVITAR CONTAMINACIONES
En general deben mantenerse las siguientes precauciones:
Ausencia de RNAsas/DNasas en el material fungible a utilizar.
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Uso de agua destilada autoclavada (25 min., 120ºC) libre de RNAsa/DNasas.
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Uso de puntas estériles con filtro.
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Buena homogeneización de los componentes del kit una vez descongelados.
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Mantener en todo momento las mezclas en hielo.
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Repetidos ciclos de congelación y descongelación podrían reducir la sensibilidad de los reactivos y con ello la
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sensibilidad del método, por lo que es conveniente dispensar los reactivos en alícuotas de un solo uso,
manteniéndolas a -20ºC y protegidas de la luz hasta su utilización.
Para evitar contaminaciones que generen falsos positivos, es importante:
Separar físicamente el control positivo de PCR del resto de reactivos del kit.
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La manipulación de las muestras a testar se debe realizar en un espacio físico diferente de donde se realizan los
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análisis de productos amplificados.
El control positivo de PCR debe ser añadido en un espacio físico diferente de donde se añade la mezcla y de
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donde se manipulan las muestras a testar.

6. RECOGIDA Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS

INgene q IBV SYBR está indicado para la detección y (opcionalmente cuantificación) de ARN del virus de la Bronquitis
Infecciosa (IBV) a partir de diferentes muestras biológicas.
El ensayo ha sido optimizado para su utilización con muestras de torunda traqueal o cecal, riñón y tráquea, por ser éstas
las muestras de mayor interés desde el punto de vista clínico.
El transporte al laboratorio se realizará en frío dentro de las primeras 24 horas, si bien es posible el almacenamiento de
las muestras a -20ºC hasta su extracción.
7. EXTRACCIÓN DE MATERIAL GENÉTICO
Una vez aislado el ARN, se recomienda chequear la calidad y cantidad del ARN aislado realizando una medida de
absorbancia. Se utilizará cualquier procedimiento disponible en el laboratorio con el que se obtenga una buena calidad
de material genético a partir de las muestras. INGENASA puede suministrar un protocolo y buffer de extracción bajo
pedido.
Ingenasa ha realizado este ensayo con los métodos de extracción basados en:
Método de Chomczynski and Sacchi de extracción fenólica.
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Métodos automáticos con uso de bolas magnéticas (Mag MAX
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Métodos de purificación por columna: The QIAamp® Viral RNA Mini Kit (QIAGEN), High pure Viral Nucleic Acid
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kit (ROCHE).
INSTRUCCIONES DE USO – ESPAÑOL
TM
Total NA isolation kit, Ref AM1840).
(Versión 1410-14) – PAG.3.