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Teoría de funcionamiento
En esta sección se explica la teoría y la tecnología en que se basa el funcionamiento del detector
ACQUITY PREMIER FLR.
2.1 Teoría de fluorescencia
La fluorescencia tiene lugar cuando algunas moléculas absorben la luz a determinadas
longitudes de onda, lo que produce su ascenso a un estado superior de energía. Al volver a su
estado de energía normal, las moléculas "excitadas" liberan la energía absorbida en forma de
fotones.
Muchos compuestos orgánicos absorben la luz, pero pocos tienen una respuesta fluorescente.
Los sistemas de cromatografía líquida (HPLC) que incorporan detección de fluorescencia
identifican con eficacia hidrocarburos poliaromáticos, aflatoxinas, vitaminas, aminoácidos, etc.
Los métodos de derivatización química amplían la detección de fluorescencia a algunos
compuestos no fluorescentes como los pesticidas carbamatos.
La detección de fluorescencia requiere ambas longitudes de onda de excitación/emisión, lo que
lleva a un mayor grado de sensibilidad. Como resultado, esta técnica es útil para los análisis que
requieren límites de detección bajos.
Algunas condiciones pueden interferir con la habilidad de un compuesto de dar respuesta
fluorescente, disminuyendo el rendimiento analítico:
• Cambios de pH: La pérdida o ganancia de protones, y el incremento o disminución de carga
que conllevan, afectan a la estructura electrónica de un analito y pueden aumentar o
disminuir la fluorescencia.
• Cambios de temperatura: La fluorescencia disminuye a medida que la temperatura de la
muestra aumenta.
• Cambios de la cantidad de oxígeno disuelto: En algunas moléculas, la presencia de oxígeno
disuelto disminuye la fluorescencia.
Los detectores de fluorescencia se pueden adaptar para medir la quimioluminiscencia, con la
que una molécula sin exposición a ninguna energía de excitación emite una señal de intensidad
baja. Puede realizarse este tipo de detección desactivando la fuente de luz o (como en el caso
del detector FLR) activando un obturador para impedir que cualquier luz de excitación alcance la
celda de flujo.
El proceso de detección de fluorescencia comprende una fuente de excitación y los siguientes
procesos:
20 de octubre de 2020, 715006949ES Versión 00
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