Procedimiento De Ensayo; Consideraciones Generales; Cálculo De Los Resultados - tecan BM52011 Instrucciones De Uso

Estriol, free ELISA (BM52011)
7

PROCEDIMIENTO DE ENSAYO

7.1

Consideraciones generales

− Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso. Todos los
reactivos deben mezclarse sin formar espuma.
− Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupción.
− Utilizar puntas de pipeta de plástico nuevas para cada estándar, control o muestra para evitar
combinaciones cruzadas.
− La absorbancia es función del tiempo de incubación y la temperatura. Antes de comenzar el ensayo, se
recomienda que todos los reactivos estén preparados, tapas removidas, todos los pocillos que se
necesiten asegurados en recipiente, etc. Esto asegurará un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin
que haya interrupciones.
− Como regla general, la reacción enzimática es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura.
7.2 Procedimiento de ensayo
Cada uno debe incluir una curva de estándares.
1. Asegurar el número deseado de pocillos en el recipiente.
2. Dispensar 10 µL de cada Standard, Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos
adecuados.
3. Dispensar 100 µL de Enzyme Conjugate a cada pocillo.
Mezclar totalmente durante 10 segundos. Es importante mezclar completamente en este paso.
4. Incubar durante 60 minutes a temperatura ambiente.
5. Sacudir enérgicamente el contenido de los pocillos.
Lavar los pocillos 4 veces con 400 µL Wash Solution diluida por pocillo) , si se utiliza un lavador de
placas - o -
Lavar los pocillos 4 veces con 300 µL Wash Solution diluida por pocillo para el lavado manual.
Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales.
Nota importante:
La sensibilidad y la precisión de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realización
correcta del proceso de lavado!
6. Adicionar 100 µL de Substrate Solution a cada pocillo.
7. Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente.
8. Parar la reacción enzimática mediante la adición de 100 µL de Stop Solution a cada pocillo.
9. Determinar la absorbancia (OD) de la solución en cada pocillo a 450 nm (lectura) y a 620 - 630 nm (se
recomienda la sustracción de fondo) con un lector de microplacas. Se recomienda que los pocillos
se lean dentro de los 10 minutos siguientes a la adición de la solución de parada (Stop Solution).
7.3 Cálculo de los Resultados
1. Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de estándares, controles y muestras de
pacientes.
2. Construir una curva estándar mediante la representación de la absorbancia media obtenida para cada
estándar frente a su concentración con el valor de absorbancia en el eje vertical (Y) y la concentración
en el eje horizontal (X).
3. Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentración correspondiente a
partir de la curva estándar.
4. Método automatizado: Los resultados en las instrucciones de uso se han calculado automáticamente
usando una curva de regresión 4 Parámetros. (4 Parámetros Rodbard o 4 Parámetros Marquardt son
los métodos preferidos.) Otras funciones de regresión darán lugar a resultados sensiblemente
diferentes.
5. La concentración de las muestra puede leerse directamente de la curva de estándares. Las muestras
con concentraciones superiores al mayor estándar han de diluirse. Para el cálculo de las
concentraciones hay que tener en cuenta el factor de dilución.
Version 13.0 2019/09
ESPAÑOL
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