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TAE: Tradicionalmente el Tris acetato ha sido el tampón que
TBE: La significativamente mayor capacidad tamponadora del
Añada bromuro de etidio al tampón de electroforesis diluido a una
4.
concentración final de 0,5 µg/ml.
NOTA:
La incorporación de bromuro de etidio tanto al gel como al
tampón de migración tendrá como resultado máximos niveles
de detección, y proporcionará elevados niveles de
fluorescencia de la muestra y un nivel uniformemente bajo de
fondo.
Añada 6,6 ml del tampón de electroforesis 1X que contiene etidio
5.
que se ha elaborado en el paso 4 por cada milímetro de espesor
de gel que se desee, hasta un máximo de 100 ml, al matraz que
contiene la agarosa. Una solución de gel 100 ml creará un gel
con un espesor de 7,6 mm. Se pueden hacer geles más
delgados, no obstante, se debe tener cuidado para que los
pocillos sean suficientemente profundos para acomodar el
volumen de muestra que se desea
N.º catálogo
Descripción del peine
E0167
1 mm, 14 dientes
E0167
1 mm, 28 dientes
E0168
1 mm, 5 dientes
E0168
1 mm, 8 dientes
6. Tome nota del volumen total de la solución para que se pueda
determinar y corregir el grado de evaporación.
7. Caliente la suspensión de agarosa en un microondas durante 90
segundos. Agite el matraz para asegurarse de que penetran en la
solución los granos adosados a las paredes. La agarosa sin
disolver se muestra como pequeñas "lentes" que flotan en la
solución. Caliente durante entre otros 30 y 60 segundos. Vuelva a
examinar la solución y repita el proceso de calentamiento hasta
que la agarosa se disuelva completamente.
más se ha empleado. Sin embargo, su relativamente baja
capacidad de tamponadora se agotará durante una
electroforesis extendida, por lo que se necesita recircular
el tampón en ciclos de más de 140 mA-horas. Entre las
ventajas potenciales de usar el tampón TAE frente al
tampón TBE encontraremos una resolución superior del
ADN superhelicoidal y una migración de aproximadamente
10 % más rápida de los fragmentos de ADN lineal de doble
(1)
cadena
.
Tris-borato y su relativamente bajo consumo de corriente
elimina la necesidad de recirculación en todos los ciclos, a
excepción de los de más duración (> 300 mA-horas). Los
sistemas de tampón TBE no se recomiendan cuando
después de la electroforesis se vayan a recuperar los
fragmentos a partir del gel.
Anchura de los pocillos
5 mm
2,5 mm
8 mm
4 mm
.
Volumen de la muestra 1 mm
5 ul
2,5 ul
8 ul
4 ul
4
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