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Programas PCR
Creación de un programa PCR con el asistente de PCR
2 Información del cebador
3 Longitud del producto
4 Información de origen del ADN
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• Introduzca la información del cebador de uno de los dos modos
siguientes. Pulse Siguiente (Next) al terminar.
•Introduzca sus secuencias de cebador o navegue hasta su secuencia en
una unidad USB conectada. Recomendamos utilizar la unidad USB
facilitada con el termociclador.
•Si no tiene la información de la secuencia, introduzca las temperaturas
de fusión (Tm) de sus cebadores.
La información del cebador se utiliza para determinar la temperatura de
hibridación del programa PCR. La temperatura de hibridación se ajusta
5°C por debajo del promedio de Tm de los dos cebadores. Si ha introducido
las secuencias de bases de los cebadores (en vez de las de las Tm) el
software calcula la Tm de cada cebador a partir de la fórmula siguiente:
Tm = 69,3 + (0,41 × GC%) – (650/N)
donde GC% es el porcentaje de contenido GC en la secuencia del cebador
y N es el número de nucleótidos en la secuencia del cebador
• Introduzca la longitud de producto esperada y seleccione las unidades
como bp o kb. Pulse Siguiente (Next) al terminar.
El asistente utiliza la longitud del producto para ajustar el tiempo de
extensión del programa PCR.
• Especifique el origen del ADN de molde en la lista y a continuación pulse
Siguiente (Next). Las opciones de origen son:
•ADNc (cDNA)
•ADN genómico (Genomic DNA)
•ADN vector (Vector DNA)
La información de origen de ADN se utiliza para determinar la duración del
inicio en caliente o del paso de desnaturalización inicial y del paso de
extensión.
Guía de configuración y uso de Agilent SureCycler 8800
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