Añadir Un Control Phix (Opcional); Cargar Consumibles En El Cartucho - Illumina iSeq 100 Manual De Uso

Guía del sistema de secuenciación iSeq 100
Añadir un control PhiX (opcional)
PhiX es una biblioteca de Illumina, pequeña y lista para usar, con una representación equilibrada de
nucleótidos. Con una adición opcional del 2 % de PhiX a su biblioteca, podrá obtener más mediciones. En el
caso de bibliotecas de poca diversidad, se recomienda una adición opcional del 5 % para aumentar la
diversidad de la base.
NOTA
Una adición opcional de solo el 1 % es eficaz para obtener más mediciones, pero complica el pipeteo.
1 Combine los siguientes volúmenes en un microtubo de baja adherencia para preparar
50 µl de PhiX a 1 nM:
PhiX a 10 nM (5 µl)
u
RSB (45 µl)
u
2 Agite en vórtice brevemente y, a continuación, centrifugue a 280 × g durante un minuto.
3 [Opcional] Almacene PhiX a 1 nM a unas temperaturas entre –25 °C y –15 °C durante un periodo de un
mes como máximo.
4 Combine los volúmenes siguientes en un microtubo de baja adherencia para diluir PhiX con la misma
concentración de carga que la biblioteca, por ejemplo:
Concentración de carga de PhiX
(pM)
50
100
200
5 Combinar PhiX y biblioteca:
Para una adición opcional del 2 % añada 2 µl de PhiX diluido a 100 µl de biblioteca diluida.
u
Para una adición opcional del 5% añada 5 µl de PhiX diluido a 100 µl de biblioteca diluida.
u
El porcentaje de PhiX real varía en función de la calidad y la cantidad de la biblioteca.
6 Agite en vórtice brevemente y, a continuación, centrifugue a 280 × g durante un minuto.
7 Reserve la biblioteca con la adición de PhiX en hielo.

Cargar consumibles en el cartucho

1 [Opcional] Para ver un vídeo de instrucciones sobre la preparación y carga de cartuchos, seleccione
Sequence (Secuencia).
2 Abra la bolsa del cartucho por las ranuras.
3 Retire el cartucho de la bolsa y evite la ventana de acceso de la parte superior del cartucho. Deseche la
bolsa.
4 Invierta el cartucho cinco veces para mezclar los reactivos.
Los componentes internos pueden hacer ruido durante la inversión, pero es normal.
5 Golpee cinco veces el cartucho (con la etiqueta hacia arriba) en la mesa u otra superficie dura para
asegurar la aspiración del reactivo.
N.º de documento 1000000036024 v05 ESP
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Volumen de PhiX a 1 nM
(µl)
5
10
20
Volumen de RSB
(µl)
95
90
80
24