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Qiagen Artus Parvo B19 Manual De Uso

Diagnóstico cuantitativo in vitr
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artus
Parvo B19 TM PCR Kit
Manual de uso
Diagnóstico cuantitativo in vitro
Para utilizar con el
ABI PRISM
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7000, 7700 y 7900HT Sequence Detection Systems
Marzo 2015 - Versión 1
4504163, 4504165
1046912ES
QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, 40724 Hilden, ALEMANIA
R3
1046912ES
Sample & Assay Technologies
24 (Nr. cat. 4504163)
96 (Nr. cat. 4504165)

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Resumen de contenidos para Qiagen Artus Parvo B19

  • Página 1 96 (Nr. cat. 4504165) Diagnóstico cuantitativo in vitro Para utilizar con el ABI PRISM ® 7000, 7700 y 7900HT Sequence Detection Systems Marzo 2015 - Versión 1 4504163, 4504165 1046912ES QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, 40724 Hilden, ALEMANIA 1046912ES Sample & Assay Technologies...
  • Página 2 QIAGEN: Sample and Assay Technologies QIAGEN es el proveedor líder de tecnologías innovadoras para la preparación de muestras y ensayos de biología molecular que permiten el aislamiento y la detección del contenido de cualquier muestra biológica. Nuestros productos y servicios de vanguardia y máxima calidad garantizan el éxito desde la muestra hasta el resultado.

  • Página 3: Tabla De Contenido

    10. Solución de problemas ............42 11. Especificaciones ..............44 11.1 Sensibilidad analítica ................44 11.2 Especificidad .................... 45 11.3 Precisión ....................46 11.4 Robustez ....................48 11.5 Reproducibilidad ..................48 11.6 Evaluación diagnóstica ................49 artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 4 12. Limitaciones en la utilización del producto ......49 13. Informacion de seguridad ............ 49 14. Control de calidad ..............49 15. Bibliografía ................49 16. Explicación de los símbolos ..........50 artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 5 Parvo B19 TM PCR Kit Para utilizar con ABI PRISM 7000, 7700 y 7900HT Sequence Detection Systems. Atención: El artus Parvo B19 TM PCR Kit no se puede utilizar ni con el ® GeneAmp 5700 SDS ni con el formato de placa de 384-pocillos del ABI PRISM 7900HT SDS.

  • Página 6: Almacenamiento

    2. Almacenamiento Los componentes del artus Parvo B19 TM PCR Kit deben almacenarse a una temperatura entre –30 °C y –15 °C y pueden ser utilizados hasta la fecha indicada en la etiqueta. Evite congelarlos y descongelarlos repetidamente (más de 2 veces), ya que puede disminuir su sensibilidad.

  • Página 7: Medidas Generales De Seguridad

    (sarampionosa) y, sobre todo en adultos, pueden estar relacionados con dolores reumáticos articulares. Parvovirus B19 es la principal causa de aparición de crisis aplásticas transitorias en pacientes con anemia hemolítica. Se pueden observar complicaciones fetales graves durante el embarazo, artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 8: Principio De La Pcr A Tiempo Real

    PCR (Mackay, 2004). 7. Descripción del producto El artus Parvo B19 TM PCR Kit es un sistema listo para utilizar e indicado para la detección del ADN del Parvovirus B19 mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en el ABI PRISM 7000, 7700 y 7900HT Sequence Detection System.

  • Página 9: Protocolo

    ARN así preparada y almacénelas a -20°C. Evite congelar y descongelar las alícuotas de carrier de ARN (más de dos veces). Para cada purificación debe añadirse 1 µg del carrier de ARN por 100 artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 10 Antes de empezar cada purificación, una mezcla de tampón de lisis y carrier de ARN (así como el Control interno, véase 8.2 Control interno) debe prepararse inmediatamente antes de empezar cada purificación siguiendo el siguiente esquema. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 11: Control Interno

    13.000 rpm) previa a la elución para eliminar posibles restos de etanol. De este modo, se evitan posibles inhibiciones de la PCR. El artus Parvo B19 TM PCR Kit no está indicado para métodos de • purificación que utilizan fenol.

  • Página 12: Cuantificación

    (véase 8.5 Programación del ABI PRISM SDS). El software de los ABI PRISM 7000, 7700 y 7900HT SDS no permite importar curvas estándar de experimentos anteriores. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 13 SDS) www.qiagen.com/Products/ByLabFocus/MDX. El aumento de volumen condicionado por la adición del Control interno es irrelevante en la preparación de la reacción de PCR. La sensibilidad del sistema de detección no se ve perjudicada. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 14: Preparación De La Pcr

    Si se utiliza el retaining rack de dos piezas, es necesario abrir los tubos de reacción tanto al introducirlos como al extraerlos. Para evitar contaminación durante ésta operación, utilice solamente la parte inferior del retaining rack artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 15 Si desea emplear el Control interno exclusivamente para analizar una posible inhibición de la PCR, debe añadirlo directamente a la Parvo B19 RG/TM Master. En ese caso, utilice el siguiente esquema de pipeteo (véase también el cuadro esquemático de la Fig. 2): artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 16 (véase 8.5 Programación del sistema ABI PRISM SDS) y, a continuación, transfiéralas al aparato. El aumento de volumen condicionado por la adición del Control interno a de detección no se ve perjudicada. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 17 El uso de placas de reacción ópticas de 96-pocillos junto con láminas • adhesivas ópticas requiere el uso de una almohadilla para apretarlas (Optical Cover Compression Pads). artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 18 Esquema de trabajo para el análisis de la purificación y la inhibición de la PCR. Con cada pipeteo, es imprescindible que compruebe que las soluciones utilizadas estén completamente descongeladas, bien mezcladas y que hayan sido centrifugadas brevemente. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 19 Esquema de trabajo para el análisis de la inhibición de la PCR. Con cada pipeteo, es imprescindible que compruebe que las soluciones utilizadas estén completamente descongeladas, bien mezcladas y que hayan sido centrifugadas brevemente. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 20: Programación Del Abi Prism Sds

    [*.sdt]) aparece en la lista Template o bien puede seleccionarlo mediante la función Browse (véase 8.5.1.5 Almacenamiento de la reacción de PCR). Confirme sus datos (OK). Fig. 3: Ajustes al crear un nuevo ensayo de PCR (New Document). artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 22: Creación/Selección De Los Fluorocromos

    La opción Tools del submenú Detector Manager le permite asignar al ensayo los fluorocromos correspondientes. Para detectar el ADN del Parvovirus B19 así como el Control interno con la ayuda del artus Parvo B19 TM PCR Kit, deben definirse los Reporter/Quencher que aparecen en la siguiente tabla: Detección...
  • Página 24 Para poner nombre a cada una de las reacciones preparadas, seleccione la posición correspondiente en la placa e introduzca el nombre bajo Sample Name. Tenga en cuenta que el software identifica las artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 25: Creación Del Perfil De Temperatura

    - 5) e introduzca las concentraciones correspondientes (véase 1. Contenido) para cada uno de los estándares (Quantity). Tenga en cuenta que para ejecutar una PCR con el artus Parvo B19 TM PCR Kit debe introducir ROX™ como referencia pasiva (Passive Reference). La distribución uniforme...

  • Página 26: Almacenamiento De La Reacción De Pcr

    Browse. Antes de iniciar la reacción de PCR, recuerde grabarla de nuevo como SDS Document (*.sds). De este modo, se asegura el almacenamiento de los datos que serán recogidos durante el transcurso de la reacción de PCR. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 27: Inicio De La Reacción De Pcr

    Seleccione la opción New Plate del menú File del ABI PRISM 7700 SDS e introduzca los siguientes ajustes básicos para el nuevo ensayo (véase la Fig. 9). Confirme sus datos (OK). Fig. 9: Ajustes al crear un nuevo ensayo de PCR (New Plate). artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 28: Selección De Los Fluorocromos Y Asignación Del Tipo De Muestra

    (Parvo B19 RG/TM IC) Para detectar el ADN del Parvovirus B19 con la ayuda del artus Parvo B19 TM PCR Kit, seleccione el fluorocromo Reporter FAM análogo a la tabla. Esto es válido tanto para los estándares (STND), las muestras (UNKN) así como para los controles negativos (UNKN).

  • Página 29: Asignación De La Información Necesaria De Los Pocillos Dentro De La Placa

    Fig. 11/12: Asignación de la información necesaria de los pocillos dentro de la placa. Para la elaboración de una curva estándar, utilice para cada PCR todos los artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 30 Increment: 0.0°C, 0.0 Seconds). Fig. 13: Creación del perfil de temperatura. Además, en el menú Thermal Cycler Conditions se encuentra la opción Show Data Collection. Al seleccionar esta opción, llegará a la ventana representada artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 31: Ajustes Adicionales Importantes

    Analysis. Seleccione en el menú Instrument, bajo la opción Diagnostics la subnota Advanced Options que aparece activada. Seleccione los ajustes según la Fig. 15. Mediante la desactivación de la función Spectra Components (Analysis), los archivos de calibración almacenados hasta el artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 32 Covers) o tubos de reacción ópticos con tapas planas, el tiempo de exposición (Exposure Time) es de diez milisegundos. Si utiliza tubos de reacción ópticos con tapas convexas, aumente el tiempo de exposición a 25 milisegundos. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 33 PCR. 8.5.2.7 Inicio de la reacción de PCR Para iniciar la reacción de PCR, seleccione la opción Run del menú Instrument o el botón Run del nivel Analysis. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 34: Programación Del Abi Prism 7900Ht Sds

    Browse (véase 8.5.3.5 Almacenamiento de la reacción de PCR). Confirme sus datos (OK). Atención: El artus Parvo B19 TM PCR Kit no puede utilizarse con el formato de placa de 384-pocillos del ABI PRISM 7900HT SDS. Fig. 16: Preajustes al crear un nuevo ensayo de PCR (New Document).
  • Página 35 Setup/función Add Detector) asigne al ensayo los fluorocromos correspondientes. Para detectar el ADN del Parvovirus B19 y el Control interno con el artus Parvo B19 TM PCR Kit, deben definirse los Reporter/Quencher que aparecen en la tabla siguiente: Detección...
  • Página 36 (Well Inspector) una tabla en la que aparecen listados los fluorocromos previamente seleccionados en 8.5.3.2 (véase la Fig. 20). Fig. 20: Asignación de la información necesaria de los pocillos dentro de la placa. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 37 - 5) e introduzca las concentraciones correspondientes (véase 1. Contenido) para cada uno de los estándares (Quantity). Tenga en cuenta que para ejecutar una reacción de PCR con el artus Parvo B19 TM PCR Kit debe introducir ROX como referencia pasiva (Passive Reference).
  • Página 38 Elimine haciendo click con el ratón todos los símbolos excepción símbolo paso Annealing-Extension (Stage2/Step2) y así evitar mediciones de fluorescencia innecesarias. De esta manera se reduce al mínimo la duración de las mediciones y la cantidad de datos generados. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 39 (*.sds). De este modo, se asegura el almacenamiento de los datos que serán recogidos durante el transcurso de la reacción de PCR. 8.5.3.6 Inicio de la reacción de PCR Para iniciar la reacción de PCR, seleccione la opción Start del menú Instrument. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 40: Análisis

    Si no se instala ningún fichero de calibración, cree estos ficheros tal y como se indica en las instrucciones del manual ABI PRISM SDS User Guide/Manual. Si debe integrar más de un sistema artus TM PCR al mismo tiempo (tenga en artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 41 Puede hallar ejemplos de reacciones de PCR negativas y positivas en las figuras 23 / 24 (ABI PRISM 7000 SDS), 25 / 26 (ABI PRISM 7700 SDS) y 27 / 28 (ABI PRISM 7900HT SDS). artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 42 Fig. 24: Detección del Control interno (IC) mediante la detección de una señal fluorescente VIC (ABI PRISM 7000 SDS) con amplificación simultánea de los Estándares de cuantificación (Parvo B19 RG/TM QS 1 - 5). NTC: non-template control (control negativo). artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 44 Fig. 26: Detección del Control interno (IC) mediante la detección de una señal fluorescente VIC (ABI PRISM 7700 SDS) con amplificación simultánea de los Estándares de cuantificación (Parvo B19 RG/TM QS 1 - 5). NTC: non-template control (control negativo). artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 45 Fig. 28: Detección del Control interno (IC) mediante la detección de una señal fluorescente VIC (ABI PRISM 7900HT SDS) con amplificación simultánea de los Estándares de cuantificación (Parvo B19 RG/TM QS 1 - 5). NTC: non-template control (control negativo). artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 46: Solución De Problemas

    • más componentes del kit detalladas en 2. Almacenamiento o el artus Parvo B19 TM PCR Kit ha caducado. � Por favor compruebe las condiciones de almacenamiento así como la fecha de caducidad de los componentes (compruebe la etiqueta del kit) y use un nuevo kit si es necesario.
  • Página 47 • más componentes del kit detalladas en 2. Almacenamiento o el artus Parvo B19 TM PCR Kit ha caducado. � Por favor compruebe las condiciones de almacenamiento así como la fecha de caducidad (compruebe la etiqueta del kit) de los componentes y use un nuevo kit si es necesario.

  • Página 48: Especificaciones

    Fig. 29. El límite de detección del artus Parvo B19 TM PCR Kit es de 0,2 UI/µl (ABI PRISM 7000 SDS), (p = 0,05). Esto significa que hay un 95 % de probabilidades que se detecten 0,2 UI/µl (ABI PRISM 7000 SDS).

  • Página 49: Especificidad

    Parvovirus B19 incluidos en la Parvo B19 RG/TM Master. Para la determinación de la especificidad del artus Parvo B19 TM PCR Kit con respecto a las especies íntimamente relacionadas, se llevó a cabo un análisis de las reacciones cruzadas de un grupo control, como se muestra en...

  • Página 50: Precisión

    Virus de leucemia de células T humano tipo 2 11.3 Precisión Los datos de precisión para el artus Parvo B19 TM PCR Kit permiten la determinación de la varianza total del ensayo. Esta varianza total consiste en la determinación de la variabilidad intra-ensayo (variabilidad entre muestras de igual concentración dentro de un ensayo), la variabilidad inter-ensayo...
  • Página 51 Variabilidad inter-lotes: 0,55 0,29 1,79 Parvo B19 RG/TM QS 5 Variabilidad inter-lotes: 0,33 0,10 1,31 Control interno Varianza total: 0,48 0,23 1,56 Parvo B19 RG/TM QS 5 Varianza total: 0,46 0,22 1,88 Control interno artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...

  • Página 52: Robustez

    Tras la purificación usando QIAamp DNA Mini Kit (ver capítulo 8.1 Purificación del ADN) las muestras fueron analizadas con el artus Parvo B19 TM PCR Kit. Para todas las muestras de Parvovirus B19 la tasa de error fue del 0 %. La robustez del Control interno fue comprobado adicionalmente mediante la purificación y análisis de 30 muestras de suero...

  • Página 53: Evaluación Diagnóstica

    14. Control de calidad En conformidad con la certificación ISO 9001 e ISO 13485 del sistema de gestión de la calidad de QIAGEN, cada lote del artus Parvo B19 TM PCR Kit fue testado respecto a especificaciones establecidas para garantizar la calidad constante del producto.

  • Página 54: Explicación De Los Símbolos

    Dispositivo médico para diagnóstico in vitro Componentes Contenido Número Etanol Número mundial de artículo comercial Contiene suficientes reactivos para <N> <N> pruebas Limitación de temperatura Consultar las instrucciones de uso Estándar de cuantificación Control interno artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 55 Esta página se ha dejado en blanco intencionadamente. artus Parvo B19 TM PCR Kit 03/2015...
  • Página 56 Todos los nombres registrados, marcas comerciales, etc, usados en este documento, incluso aquellos que no estén específicamente marcados, están protegidos por la ley. El artus Parvo B19 TM PCR Kit es un kit de diagnóstico marcado con CE siguiendo la directiva europea de diagnóstico in vitro 98/79/EC. No disponible en todos los países.
  • Página 57 Australia Orders 1-800-243-800 Fax 03-9840-9888 Technical 1-800-243-066    Austria Orders 0800-28-10-10 Fax 0800-28-10-19 Technical 0800-28-10-11    Belgium Orders 0800-79612 Fax 0800-79611 Technical 0800-79556    Brazil Orders 0800-557779 Fax 55-11-5079-4001 Technical 0800-557779  ...

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