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Datos sin procesar frente a datos deconvolucionados
El software SpectroFlo guarda los datos de citometría de flujo en el formato FCS 3.1. Los datos se
guardan tanto en formato sin procesar como deconvolucionado. Los datos sin procesar contienen
toda la información de fluorescencia de cada detector (es decir, V1, V2, V3, etc.). Cada canal
detector se designa por su láser de excitación y su posición en el conjunto. Por ejemplo,
B3 es el tercer canal del conjunto de detectores de láser azul.
Los datos deconvolucionados contienen toda la información de fluorescencia de cada marcador
fluorescente del experimento. Para deconvolucionar datos se requieren controles con tinción
única (o controles de referencia) para cada uno de los marcadores fluorescentes (así como un
control sin tinción). Durante la deconvolución se utiliza un algoritmo matemático para la
descomposición de los componentes fluorescentes de la muestra utilizando los controles de
referencia. Los parámetros de los datos deconvolucionados se mostrarán como el nombre
del marcador fluorescente junto con sus etiquetas asociadas.
El módulo Acquisition (Adquisición) ofrece las herramientas que le permiten crear un experimento.
Un experimento es un conjunto de tubos, ajustes del instrumento, criterios de adquisición (regla
de parada), marcadores fluorescentes, etiquetas y hojas de trabajo diseñados para la adquisición
de muestras. Véase
"Acerca de los experimentos" en la página
Se pueden crear experimentos nuevos y guardados o acceder a ellos en la pestaña Experiments
(Experimentos) del módulo Acquisition.
Deconvolución y compensación
Los archivos FCS sin procesar se pueden deconvolucionar espectralmente de las siguientes
maneras:
•
Grupo de referencia en el experimento: los controles de referencia recopilados como archivos
FCS dentro del experimento se pueden usar para la deconvolución mediante el asistente
Unmixing (Deconvolución) del módulo Acquisition.
•
Controles de referencia procesados durante QC & Setup (CC y configuración): los controles de
referencia procesados durante QC & Setup se pueden usar para la deconvolución mediante
el asistente Unmixing del módulo Acquisition.
•
Deconvolución desde el módulo Extra Tools (Herramientas adicionales): los archivos FCS
recopilados de diferentes experimentos se pueden deconvolucionar en el módulo Extra Tools.
Los archivos FCS se pueden importar y deconvolucionar en este módulo.
Los archivos FCS sin procesar también se pueden compensar con el método convencional
mediante la pestaña Virtual Filters (Filtros virtuales) del módulo Extra Tools. Los canales detectores
se pueden agrupar juntos para simular el análisis de los datos como si se hubieran adquirido
usando un filtro. Véase
información.
"Virtual Filters (Filtros virtuales)" en la página 78
Adquisición
18.
para obtener más
Capítulo 5: Adquisición
5
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