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minutos.
D. Retirada del peine
1. Cuando el gel se haya solidificado y esté completamente
opaco, extraiga con cuidado el peine con un suave movimiento
de contoneo hacia arriba. Si es difícil extraer el peine o se está
utilizando un gel de bajo porcentaje, cubra la zona del peine
con una pequeña cantidad de tampón de electroforesis 1X para
preservar la integridad de los pocillos. Revise los pocillos para
asegurarse de que sus bases están intactas.
PRECAUCIÓN:
Una exposición prolongada de los peines que se
suministran a geles que contengan formaldehído hará que
se degraden. Asegúrese de retirar los peines de los geles de
formaldehído en cuanto se haya realizado el endurecimiento
del gel y lávelos bien antes de guardarlos.
Si un gel no se va a utilizar inmediatamente después de la preparación,
extráigalo del dispositivo de moldeo y colóquelo en un recipiente o bolsa
de plástico y sumérjalo en un tampón de electroforesis que contenga 1
mM NaN3. Almacene a +4
E. Carga de las muestras en el gel
1. Extraiga la cubeta de moldeo que contenga el gel de agarosa
endurecido del dispositivo de moldeo levantando los extremos.
Coloque la cubeta y el gel en la unidad principal de forma que
los pocillos de las muestras estén en el mismo extremo que el
electrodo negativo (negro).
2. Rellene la unidad con lo que quede del tampón de
electroforesis 1X que contenga bromuro de etidio elaborado
previamente (o un tampón MAE 1X para geles de ARN),
cubriendo el gel hasta una profundidad de 1-5 mm. Se
necesitarán unos 300 ml de tampón.
NOTA:
Es muy importante utilizar el mismo lote de tampón de
electroforesis para el gel y para el tampón de migración.
Ligeras variaciones de la composición del tampón entre el
gel y el tampón de migración pueden tener como resultado
gradientes de pH o iónicos que pueden repercutir
significativamente en la movilidad de las muestras.
3. Realice un ciclo previo de los geles de ARN a 100 V durante
cinco minutos antes de cargar las muestras.
o
C.
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