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bromuro de etidio reduce la eficiencia de transferencia de
las muestras. Por lo tanto, si las muestras se van a analizar
mediante hibridación northern después de la electroforesis,
realice carriles duplicados para la tinción, o reduzca la
exposición de las muestras de ARN al bromuro de etidio
siguiendo el protocolo de tinción después de la
electroforesis de la página 12.
El siguiente protocolo dará 50 ml de un gel de agarosa al 1,5 % conteniendo un
tampón 1X MOPS [ácido 3-(N-morfolino)-propanosulfónico]-Acetato-EDTA
(MAE) y 2,2 M de formaldehído, lo que da como resultado un gel con un espesor
de 7,5 mm:
1. Pese 0,5 g de agarosa y colóquelos en un matraz de 125 ml.
2. Añada 43,5 ml de agua tratada con DEPC (o anhídrido acético).
3. Tome nota del volumen total de la solución para que se pueda
determinar y corregir el grado de evaporación.
4. Caliente la suspensión de agarosa en un microondas durante
60 segundos. Agite el matraz para asegurarse de que penetran
en la solución los granos adosados a las paredes. La agarosa
sin disolver se muestra como pequeñas "lentes" que flotan en la
solución. Caliente de nuevo entre 30 y 60 segundos. Vuelva a
examinar la solución y repita el proceso de calentamiento hasta
que la agarosa se disuelva completamente.
5. Añada agua desionizada para reemplazar cualquier volumen
que se haya perdido por evaporación durante el proceso de
calentamiento.
6. Permita que la solución se enfríe hasta 60
matraz en una campana y añada 5 ml de tampón 10X MAE
(véase la fórmula en el Apéndice A), y 1,5 ml de formaldehído al
37 %.
PRECAUCIÓN:
Los vapores de formaldehído son tóxicos. La
preparación del gel debe tener lugar en una campana y las
soluciones y geles que contengan formaldehído se deben
mantener tapadas cuando sea posible.
Continúe con Sección C, Paso 1, "Moldeo del gel" en la página 12.
C. Moldeo del gel
1. Coloque el soporte de moldeo del gel en un banco de
laboratorio.
o
C. Coloque el
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