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9.
Solución de problemas (continuación)
Síntomas
Baja calidad del ARN
(los eluados deben tener una proporción de
A
/A
mayor que 1,8 y una proporción
260
280
de A
/A
entre 1,8 y 2,4).
260
230
Los eluados contienen altos niveles de
ADN (los eluados están contaminados con
ADN, lo que puede afectar a los análisis
posteriores).
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Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 EE. UU. · Teléfono gratuito en EE. UU. 800-356-9526 · 608-274-4330 · Fax 608-277-2516
TM434 · Revisión 3/21
Causas posibles y comentarios
El recuento leucocitario de la muestra de sangre estaba por encima
del rango de uso previsto del producto de entre 4 × 10
leucocitos/ml. El kit está optimizado para purificar ARN de muestras
de sangre con un recuento leucocitario de entre 4 × 10
leucocitos/ml.
Se ha empleado un volumen incorrecto de sangre completa. Añadir una
cantidad mayor que 2,5 ml de sangre completa puede provocar una
baja pureza del eluado.
La muestra de sangre era demasiado antigua. Se obtienen mejores
rendimientos con muestras de sangre recientes. Las muestras
almacenadas a 2 °C–10 °C durante más de 3 días pueden provocar una
calidad del ARN reducida.
La muestra se ha almacenado a una temperatura inferior a 2 °C
o superior a 10 °C antes de la purificación. Las temperaturas de
almacenamiento inadecuadas pueden provocar lisis de leucocitos o
degradación del ARN.
Eliminación del sobrenadante inadecuada después de lisis diferencial.
Asegúrese de que la eliminación del sobrenadante sea lo más
completa posible.
Tipo de muestra incorrecto. El producto está diseñado para usarse
con sangre completa humana. Otros tipos de muestras (por ejemplo,
médula ósea, plasma o capa leucocitaria) no se han probado con
este producto.
El recuento leucocitario de la muestra de sangre está por encima
del rango de uso previsto del producto de entre 4 × 10
leucocitos/ml.
Se ha empleado un volumen incorrecto de sangre completa. Añadir
una cantidad mayor que 2,5 ml de sangre completa puede provocar la
contaminación de los eluados con ADN.
No se ha añadido ADNasa I al cartucho. Si es posible, examine el
pocillo n.º 4 de los cartuchos usados. El pocillo n.º 4 deberá mostrar
un color verde (no amarillo) si se ha añadido ADNasa I a los cartuchos
en la sección 6.B, paso 5.
y 10 × 10
6
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y 10 × 10
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y 10 × 10
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www.promega.com
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