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6.A. Preprocesamiento de muestras de sangre completa
1.
Transfiera 2,5 ml de sangre completa bien mezclada (no congelada) del tubo de EDTA a un tubo estéril de 15 ml.
2.
Añada 7,5 ml de solución A e invierta el tubo 5–10 veces para mezclar. En este paso tiene lugar una lisis
diferencial: los eritrocitos se lisan, mientras que los leucocitos permanecen intactos.
3.
Incube los lisados a temperatura ambiente durante 10 minutos. Durante la incubación, invierta las muestras dos
veces como se indica en el paso 2 para mezclar.
4.
Centrifugue los tubos a 3000 × g en un rotor flotante durante 10 minutos.
5.
Elimine el sobrenadante por decantación o pipeteado. Gire brevemente el tubo para recoger el líquido residual
que quede en el fondo. Con una pipeta, extraiga y deseche todo el sobrenadante restante que pueda sin afectar al
sedimento de leucocitos visible.
6.
Añada 200 µl de 1-tioglicerol/solución B enfriada al sedimento y mezcle mediante el vórtex para volver a
suspender el sedimento.
7.
Añada 200 µl de tampón lítico y 25 µl de endopeptidasa K al sedimento que se ha vuelto a suspender. Mezcle
mediante el vórtex durante 15–20 segundos.
Nota: Si necesita parar durante el preprocesamiento, las muestras pueden almacenarse después del paso 7 a
entre –30 °C y –10 °C hasta 5 días. A estas temperaturas de almacenamiento, las muestras podrían congelarse o
no congelarse por completo. Cuando esté listo para reanudar la purificación de las muestras, descongele los tubos
a temperatura ambiente durante 10 minutos antes de continuar con el siguiente paso.
8.
Incube las muestras a temperatura ambiente durante 10 minutos. Mientras tanto, prepare los cartuchos como se
describe en la sección 6.B.
9.
Añada el lisado al pocillo n.º 1 del Maxwell
del cartucho).
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CSC RNA Blood Cartridge (el pocillo de mayor tamaño
®
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TM434 · Revisión 3/21
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