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5.
Antes de empezar: Preparación de las soluciones
1-tioglicerol/solución B
Prepare una mezcla de 1-tioglicerol/solución B a través de uno de los siguientes métodos:
Añada 600 µl de 1-tioglicerol al frasco de solución B y mezcle completamente. El 1-tioglicerol es viscoso, por lo que hay
que pipetearlo con cuidado para conseguir una medición precisa. Antes de usar la mezcla de 1-tioglicerol/solución B,
enfríela en hielo o a 2–10 °C.
De forma alternativa, prepare volúmenes más pequeños añadiendo 20 µl de 1-tioglicerol por milímetro de solución B.
Prepare 200 µl de 1-tioglicerol/solución B enfriada para cada muestra.
Nota: Almacene el preparado de 1-tioglicerol/solución B a 2–10 °C, donde permanecerá estable hasta 30 días.
ADNasa I
Añada 275 µl de Nuclease-Free Water al vial de ADNasa I liofilizada. Inviértalo para enjuagar la ADNasa I de la parte
inferior de la tapa y remuévalo suavemente para mezclar; no agite mediante el vórtex. Añada 25 µl de colorante azul a la
ADNasa I reconstituida como ayuda visual para el pipeteado y la preparación de los cartuchos. Cada purificación
requiere 10 µl de solución de ADNasa I preparada. Almacene la ADNasa I reconstituida a entre –30 °C y –10 °C. No
congele y descongele la ADNasa I reconstituida más de diez veces.
Precaución: Abra el vial de ADNasa I con cuidado, los bordes del vial podrían estar afilados.
6.
Purificación de ARN de sangre completa fresca en tubos de EDTA
5295MA.eps
Mantenga un entorno sin ARNasa durante el procesamiento. Utilice siempre puntas de pipeta resistentes a aerosoles y
sin ARNasa. Cambie de guantes con frecuencia para reducir las posibilidades de contaminación por ARNasa. Consulte
la sección 10 (Creación de un entorno sin ribonucleasa) para obtener más detalles.
Materiales que ha de aportar el usuario
•
Sangre completa en tubos de EDTA (no congelada); la sangre puede almacenarse hasta 3 días a 2–10 °C antes de
la purificación
•
Microcentrífuga
•
Pipetas serológicas de 10 ml (estériles)
•
Pipeteadores y puntas de pipeta sin ARNasa, estériles y resistentes a aerosoles
•
Tubos de 15 ml (estériles)
•
Centrífuga con rotor flotante
6
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