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Introducción
Descripción general del instrumento y uso previsto
Descripción general del instrumento y uso
previsto
El analizador Agilent Seahorse XFe mide la tasa de cambio del oxígeno disuelto y del
pH en el medio que rodea inmediatamente a las células vivas cultivadas en una
microplaca. Los cambios en el medio extracelular son causados por el consumo o la
producción de analitos por parte de las células. Por lo tanto, puede utilizarse una
medición sensible del flujo del medio para determinar las tasas de metabolismo
celular con gran sensibilidad y de forma totalmente no invasiva y sin marcadores.
Una característica única de la tecnología Agilent Seahorse XF es su capacidad para
realizar mediciones precisas y repetibles en tan solo cinco minutos. El instrumento,
que funciona con un cartucho de sensores, aísla unos pocos µl de medio sobre la
monocapa celular. El metabolismo celular provoca cambios rápidos y fáciles de
medir en el "microentorno" existente en este pequeño volumen.
Se necesita un cartucho de sensores XFe para realizar un ensayo. El cartucho tiene
24 o 96 sondas, y cada sonda tiene un único punto sensor de multifluorescencia que
es sensible a la concentración tanto de oxígeno como de protones. El sistema mide
la concentración de cada analito en función del tiempo y calcula automática y
simultáneamente la tasa de consumo de oxígeno (OCR) y la tasa de acidificación
extracelular (ECAR) en cada pocillo de la microplaca.
Normalmente, la duración de un ciclo de medición es de 5-8 minutos. El medio se
mezcla de forma suave, la sonda se coloca 200 µm por encima del fondo del pocillo
y se miden los niveles de analitos hasta que la concentración de oxígeno cae
aproximadamente un 20-30 % y el pH del medio se acidifica aproximadamente
0,1-0,2 unidades de pH.
Las tasas metabólicas iniciales se miden normalmente 3-4 veces, en pmol/min para
la OCR y en mpH/min en el caso de la ECAR; el compuesto se añade al medio y se
mezcla, y luego se realizan y repiten las mediciones de OCR y ECAR posteriores al
tratamiento. A medida que cambian las vías metabólicas de las células, la relación
entre la OCR y la ECAR varía.
El sistema XFe, compuesto por un analizador de sobremesa y un controlador de
pantalla táctil, está controlado por el software Wave. Este software permite todos
los aspectos de los ensayos Seahorse, incluyendo la configuración del ensayo, el
control instrumental y el análisis de datos.
Los consumibles se venden por separado e incluyen los FluxPak (que comprenden
cartuchos de sensores, placas de células y calibrante), así como una variedad de kits
de ensayo, reactivos y medios. Los cartuchos de sensores XFe son específicos para
el tipo de instrumento y pueden adquirirse exclusivamente a través de Agilent.
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Manual de funcionamiento del analizador Seahorse XFe
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