Soluciones No Fluorescentes; Calibración De Lif Para Capilares De Distintas Dimensiones - SCIEX PA 800 Plus Guía De Mantenimiento

Soluciones no fluorescentes

Normalmente, la solución no fluorescente utilizada en la calibración es el tampón de separación.
Tenga siempre cuidado de que esta solución se pueda utilizar de manera segura en el tipo de capilar
que se use. Por ejemplo, nunca se debe utilizar un tampón de borato para la calibración de capilares
recubiertos como los que se usan en las separaciones de IEF, carbohidratos y ssDNA. Otra cuestión
a tener en cuenta para los tampones es la posible interacción con la fluoresceína. Cuando
se mezclan borato y fluoresceína, la fluorescencia aumenta durante un breve periodo de tiempo.
Esto provoca una protuberancia en los datos escalonados. Para eliminar la protuberancia, se realiza
una mezcla 1:1 de la fluoresceína con el tampón para la mezcla de calibración. Esta mezcla pierde
fluorescencia después de una hora o más y se debe descartar. El agua es casi siempre segura en los
capilares y no interactúa con la fluoresceína (no es necesario realizar una mezcla 1:1 para
la solución de prueba). No se ha establecido un valor de respuesta objetivo previsto para
la calibración de agua/fluoresceína para el capilar de cristal de silicio sin recubrir de 75 μm y 60 cm.
(El agua no es un tampón de separación demasiado bueno).
Calibración de LIF para capilares de distintas dimensiones
Para las pruebas de rendimiento del detector, se utiliza un capilar de cristal de silicio sin recubrir
de 75 μm y una longitud total de 60 cm. Muchas aplicaciones requieren capilares con diferentes
dimensiones y estas dimensiones pueden afectar a la calibración de la mezcla de prueba de dos
maneras. Cuando la longitud del capilar no es de 60 cm, el cambio de escalón se produce
en un momento diferente. La calibración automática calcula este tiempo según los valores
introducidos para el capilar en el asistente de calibración. Si se cambia el diámetro del capilar,
el valor objetivo es diferente. Para un capilar de cristal de silicio sin recubrir, este nuevo valor
objetivo se puede calcular según el objetivo del capilar de 75 μm:
Área transversal de capilar de 75 μm:
Área transversal de capilar de 50 μm:
Índice del área:
Objetivo de 50 μm:
El asistente de calibración requiere un entero para un valor objetivo, por lo que el nuevo objetivo
de cristal de silicio sin recubrir de 50 μm se redondea a 15. Este redondeo no representa ningún
problema porque las RFU son unidades arbitrarias. Siempre que se utilice el mismo número como
objetivo, una determinada concentración debe tener la misma respuesta en cualquier detector,
capilar o láser. Como el objetivo se redondea a la baja, es probable que la respuesta del detector sin
procesar sea ligeramente mayor que el valor objetivo. Esto hace que el CCF sea ligeramente inferior
a uno. Esto no afecta a la sensibilidad porque el mismo CCF corrige la señal y el ruido.
Sistema de análisis farmacéutico PA 800 Plus
76 / 88
=  * r^2
= 3,14 * (75/2) ^ 2
= 4418
= 3,14 * (50/2) ^2
= 1963
= 1963/4418
= 0,44
= 0,44 * objetivo de 75 μm
= 0,44 * 35 RFU
= 15,4
Guía de mantenimiento del sistema
RUO-IDV-05-5519-ES-B | A51964AF