Preparación De Las Muestras - Hitachi ABI PRISM 3100 Manual De Inicio Rápido

Preparación de las muestras
Conjunto de
fluorocromos
Proporciones de
acervamiento
Volúmenes de carga
recomendados
El Software 3100 Data Collection ABI P
fluorocromos DS-30 y los Linkage Mapping Sets ABI P
Los fluorocromos del Conjunto de fluorocromos para Data Collection DS-30 son
6-FAM (azul), HEX (verde), NED (amarillo) y ROX (rojo).
Los fluorocromos fluorescentes se detectan con diferentes eficacias. La proporción de
acervamiento, o cantidad de cada producto marcado con colorante añadido con
respecto a los otros productos del acervo, debe ajustarse con el fin de garantizar una
detección apropiada de todos los loci.
Proporciones de acervamiento para los Linkage Mapping Sets ABI P
Para los Linkage Mapping Sets LD20, MD10 y HD5, una proporción de 1:1:1
(productos marcados con 6-FAM:HEX:NED) ofrece un equilibrio aceptable entre la
mayoría de los loci. Para cada panel de Linkage Mapping Set, acerve 1 µl de cada
producto de PCR en un tubo de microcentrifugado. En caso necesario, enrase a
10–20 µl con agua desionizada.
Coloque partes alícuotas de 10 µl de producto de PCR diluido en placas ópticas
MicroAmp de 96 ó 384 pocillos.
ADVERTENCIA PELIGRO QUÍMICO. La formamida es peligrosa si se absorbe a través
!
de la piel y puede causar irritación de los ojos, la piel y las vías respiratorias. Puede causar
lesiones en el sistema nervioso central y en los aparatos reproductores masculino y femenino,
y es un posible peligro de defectos del nacimiento. Consulte la ficha técnica de seguridad de los
materiales (MSDS) y siga las instrucciones de manipulación indicadas. Use protectores
oculares, vestimenta protectora y guantes apropiados.
Prepare la mezcla formamida:patrón de tamaño con:
1.000 µl de formamida Hi-Di™ (n.º ref. 4311320) o formamida de calidad similar
50 µl de GeneScan™-400HD ROX o 50 µl de GeneScan™-500 ROX
Nota Le recomendamos que utilice formamida Hi-Di, pero si prefiere preparar su propia
formamida, en el Appendix A, "Preparación de la formamida," encontrará información
importante al respecto.
Nota Utilice estas proporciones de productos de PCR acervados y patrones de tamaño
únicamente como punto de inicio. Optimice estas proporciones, según proceda, basándose en
los resultados de sus experimentos.
Para la carga, mezcle 1 µl de productos de PCR acervados con 10 µl de mezcla
formamida:patrón de tamaño.
RISM ®
, versión 1.0.1, admite el Conjunto de
RISM ®
LD20, MD10 y HD5.
Realización de una carrera de análisis de fragmentos 2-3
RISM