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Se necesitan una célula y un medidor de conductividad para medir la eficacia de la
Calibración del
carrera de desionización. Cuanto más desionizada está la formamida, más baja es su
medidor de
conductividad.
conductividad
Dentro del rango de medición, el medidor de conductividad debe calibrarse
rutinariamente (a 10 µS/cm o menos). Calibre el medidor utilizando soluciones de
cloruro potásico conformes a la normativa del National Institute of Standards and
Technology (NIST). Debido a que la temperatura afecta a la conductividad, las
muestras deben llevarse a temperatura ambiente antes de medir la conductividad.
Se añade EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) alcalino a la formamida desionizada
Preparación de
para estabilizarla y facilitar la inyección electrocinética de ADN. Para reducir al
EDTA
mínimo la cantidad de agua añadida a la formamida, se añade una solución madre
concentrada (200-mM) de EDTA.
Para preparar la solución madre de EDTA 200-mM:
Paso
Preparación de la
!
de la piel y puede causar irritación de los ojos, la piel y las vías respiratorias. Puede causar
formamida
lesiones en el sistema nervioso central y en los aparatos reproductores masculino y femenino,
y es un posible peligro de defectos del nacimiento. Consulte la ficha técnica de seguridad
(MSDS) y siga las instrucciones de manipulación indicadas. Use protectores oculares,
vestimenta protectora y guantes apropiados.
Para comenzar la purificación y medir la conductividad:
Paso
Acción
1
Añada 7,44 g de Na
2
Mientras la agita, ajuste el pH lentamente a 8,0–8,8 añadiendo gota a gota una
solución concentrada de hidróxido sódico.
Nota Esto facilita la disolución del EDTA con el tiempo, ya que el EDTA tiene una
solubilidad limitada hasta que se eleva el pH.
3
Enrasar a 100 ml con agua desionizada.
4
Conservar a 4 °C.
ADVERTENCIA
PELIGRO QUÍMICO. La formamida es peligrosa si se absorbe a través
Acción
1
Calibre la célula del medidor de conductividad y aclárela con agua destilada.
2
En un recipiente de polipropileno con tapón de rosca, lave 10 g de resina de
intercambio iónico Bio-Rad AG501 X8 revolviendo la muestra con 10-20 ml de
formamida durante 1 min.
3
Decante la solución o fíltrela a través de un filtro de teflón o nailon y deseche la
formamida.
4
Repita dos veces los pasos 2 y 3.
5
Añada 100 ml de formamida a la resina lavada.
6
Cierre la mezcla, asegurándose de que está bien cerrada.
7
Agite la mezcla rápidamente con un agitador magnético, o mézclela con un
mezclador eléctrico, asegurándose de que la resina está suspendida para un
mezclado y un intercambio iónico suficientes. Agite la mezcla a temperatura
ambiente durante aproximadamente 2 h.
EDTA a 70 ml de agua desionizada y agite la solución.
2
Preparación de la formamida A-3
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