Excitación De La Muestra; Cubeta De Flujo; Unidad De La Cubeta - Waters ACQUITY UPLC Guia De Inicio Rapido

de onda de segundo orden de 300 nm. Un filtro amplio puede absorber la
energía de orden superior producida por un monocromador. Del mismo modo
que un monocromador puede seleccionar la longitud de onda de excitación,
también puede hacerlo con la de la emisión (energía irradiada). Los detectores
con monocromadores de excitación y emisión pueden hacer un barrido
manteniendo la configuración fija en un monocromador y cambiando la del
otro. Este tipo de funcionamiento es necesario cuando se evalúan mezclas o se
analizan estructuras químicas.
Excitación de la muestra
La banda ancha de luz de gran intensidad de la lámpara pasa a través de un
filtro o monocromador, que selecciona una banda estrecha de longitudes de
onda. Esta banda estrecha de luz se dirige después a la cubeta de flujo, donde
excita a los analitos al atravesarla. Las longitudes de onda de excitación se
corresponden a menudo con la longitud de onda de absorbancia del analito.

Cubeta de flujo

La cubeta de flujo de cuarzo minimiza la cantidad de luz difusa que puede
afectar a la medición, y maximiza la señal de fluorescencia. El compartimento
de muestras se dispone de tal manera que la energía de fluorescencia se
capture en un ángulo perpendicular al haz (lámpara) de excitación. Esta
disposición minimiza el efecto de la dispersión de Rayleigh sobre los niveles de
luz de fondo.

Unidad de la cubeta

El Detector FLR provisto de una lámpara de mercurio-xenón puede ofrecer
una mayor sensibilidad de la que era posible con los sistemas de fluorescencia
tradicionales para HPLC. No obstante, el nuevo perfil de energía puede
requerir que el espectro de excitación de los analitos se tenga que desplazar
significativamente para ajustarse a las bandas de energía de la lámpara de
mercurio-xenón, lo cual exige la optimización de un método de detección de
HPLC tradicional para utilizarlo con el Detector para ACQUITY. Para
determinar los valores óptimos, se puede hacer un barrido de los intervalos de
longitud de onda de excitación y emisión utilizando la cubeta y ver el gráfico
de espectros en la Consola ACQUITY o en el software Empower utilizando la
función gráfica Spectrum λ-λ (Espectro λ-λ).
1-4 Teoría de funcionamiento