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Idiomas disponibles
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Italiano (Italian)
Uso previsto
Il dispositivo per elettroforesi Auto2D
®
automatizza completamente il processo di
elettroforesi 2D, separando le proteine prima in
base al punto isoelettrico e poi in base al peso
molecolare. E possibile ottenere la completa
separazione delle proteine in circa due ore.
Contenuto
• Dispositivo per elettroforesi Auto2D
®
• Cavi di alimentazione elettrica:
• cavo di alimentazione per Giappone
e Nord America
• adattatore 3P-2P per Giappone
e Nord America
• cavo di alimentazione per l'Europa
• cavo di alimentazione per la Cina
• cavo di alimentazione per il Regno Unito
Altri componenti necessari
(non inclusi)
Per i numeri di catalogo, vedere la sezione
Ordine dei prodotti a pag. 51.
• Chip Elettrodo per Auto2D
®
• Chip PAGE per Auto2D
®
• Chip IEF per Auto2D
®
• Chip Soluzioni per Auto2D
®
• Kit di reagenti con tris glicina o Tris-Tricina
per Auto2D
®
• Anfolita (scegliere l'anfolita appropriato
in base all'intervallo di pH del chip IEF)
• Acqua distillata
Manuale d'uso online
Il manuale d'uso completo include le istruzioni
dettagliate e i metodi. Può essere scaricato
dalla pagina relativa al dispositivo Auto2D
®
su SigmaAldrich.com.
20424817 Rev 06/21
All manuals and user guides at all-guides.com
Conservazione e stabilità
Il dispositivo Auto2D
deve essere
®
utilizzato/conservato solo in ambienti chiusi.
Per le informazioni sulla conservazione,
si rimanda all'etichetta apposta su
ciascun componente.
Precauzioni
Y
Y
Soltanto per scopi di ricerca.
Prima di utilizzare questo prodotto leggere
attentamente la scheda di sicurezza (allegata)
e il manuale d'uso completo nel sito
SigmaAldrich.com
.
Flusso di lavoro dell'Auto2D
Tempo richiesto: 100–155 minuti (a seconda
del metodo)
Preparazione del campione
Rimozione delle impurezze
Aggiunta dei reagenti
Caricamento del campione
30 minuti
e reidratazione del gel
5 minuti
Prima dimensione:
30 minuti
focalizzazione isoelettrica
Equilibrazione SDS
5 minuti
Seconda dimensione:
30 minuti
SDS-PAGE
Rilevazione
30
Preparazione
Reagenti
1.
Preparare e conservare i kit di reagenti
come indicato nella documentazione
fornita o nel manuale d'uso completo
(online).
2.
Lasciare che i seguenti prodotti,
conservati a basse temperature,
raggiungano la temperatura ambiente
(tenere a 20–25 °C per circa 10 minuti).
• Chip IEF
• Chip PAGE
• Soluzione di reidratazione
• Soluzione di DTT
®
• Anfolita
3.
Preparare la soluzione di reidratazione
alla concentrazione di lavoro per
la reidratazione del chip IEF e per
l'estrazione/diluizione del campione
di proteine:
Reagenti
Volume
Soluzione di
reidratazione
Soluzione di
DTT (1M)
Anfolita*
Totale
*scegliere l'anfolita appropriato in base
all'intervallo di pH del chip IEF Per gli
anfoliti alla concentrazione stock del
40%, aggiungere 1 µL. Per gli anfoliti
alla concentrazione 100X, aggiungere
2 µL.
4.
Preparare il tampone di equilibrazione alla
concentrazione di lavoro per equilibrare
le proteine separate mediante IEF, prima
dell'SDS-PAGE.
Reagenti
Volume
Premix di
tampone di
equilibrazione
Soluzione di
DTT (1M)
Totale
Italian
20424817 Rev 06/21
Preparazione dei campioni
Aggiungere il campione di proteine alla
soluzione di reidratazione alla concentrazione
di lavoro preparata come descritto al punto
3. Il campione può essere diluito 2 volte o
più con tale soluzione, fino a raggiungere
la concentrazione proteica desiderata e la
concentrazione salina adeguata.
Un'eccessiva concentrazione di sale potrebbe
compromettere la separazione delle proteine
durante la focalizzazione isoelettrica o
causare un aumento della corrente a valori
superiori ai 100 µA. I campioni con un'elevata
concentrazione salina devono essere
desalinizzati mediante una delle seguenti
metodiche:
Precipitazione con TCA/acetone seguita da
risospensione nella soluzione di reidratazione
alla concentrazione di lavoro
OPPURE
Scambio di tampone su colonnina
da centrifuga
Concentrazione
Nota: Durante la risospensione delle proteine,
finale
evitare di riscaldarle oltre i 37 °C.
189 µL
Quantificare le proteine. Nell'elettroforesi
2D è possibile caricare 0,1–25 µg di proteine.
La quantità ottimale dipende dal metodo di
10 µL
50 mM
rilevamento e dalla complessità del campione.
1–2 µL
0,5–1% v/v
Come punto di partenza si consiglia di usare
le seguenti quantità di proteine; gli utenti
200 µL
potrebbero dover ottimizzare la quantità da
caricare in relazione al loro campione specifico.
• Colorazione con blu di Coomassie: 25 µg
• Colorazione fluorescente: 10 µg
• Colorazione argentica: 5 µg
• Pre-marcatura fluorescente 3 µg
Il volume di campione da caricare nel
dispositivo è di 10–12 µL. Se necessario,
il campione può essere diluito con la soluzione
di reidratazione alla concentrazione di lavoro.
Concentrazione
finale
760 µL
40 µL
50 mM
800 µL
31
Italian
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