remel Xpect Clostridium difficile Toxin A/B Manual Del Usuario página 17

SPANISH
Clostridium difficile
Toxin A/B
USO PREVISTO
®
El kit de ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A/B de Remel es un
ensayo inmunocromatográfico rápido in vitro para la detección
cualitativa directa de toxina A y/o B de Clostridium difficile en muestras
de materia fecal humanas de pacientes sospechados de tener
enfermedad asociada a C. difficile (o CDAD, como se la conoce por sus
siglas en inglés). El ensayo está diseñado para facilitar el
diagnóstico de enfermedad asociada a C. difficile . También puede
utilizarse para confirmar la presencia de C. difficile toxigénico a partir
de cultivo en caldo de infusión de cerebro y corazón.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
La especie C. difficile se describió por primera vez en 1935, pero
recién en 1977 se establecieron vínculos entre el microorganismo y la
enfermedad. C. difficile es un bacilo grampositivo anaeróbico
productor de toxinas y formador de esporas. La presentación clínica
de la infección por C. difficile incluye, de menor a mayor gravedad,
portadores asintomáticos, colitis asociada a antibióticos, colitis
pseudomembranosa y colitis fulminante.
microbiana normal del colon, normalmente causada por una terapia
antibiótica, permite la proliferación de C. difficile . Por lo general, los
síntomas de la colitis asociada con antibióticos comienzan de cuatro
a diez días después de iniciado el tratamiento antibiótico.
La mayoría de las cepas patogénicas de C. difficile producen dos
toxinas, toxina A (enterotoxina) y toxina B (citotoxina), que son los
principales factores de virulencia del microorganismo. Aparentemente,
la actividad de estas toxinas es desencadenada por una sucesión
rápida de episodios. La toxina A es
induce grandes cambios de líquidos e inflamación de las mucosas.
La toxina B es intensamente citopática pero aún no se conoce bien
su función en el proceso de la enfermedad. Se sabe que existen otras
variantes de cepas toxina A negativas y toxina B positivas totalmente
patogénicas y capaces de producir la enfermedad en su espectro
completo. La prevalencia de estas cepas varía ampliamente según
la institución y la ubicación geográfica.
La enfermedad asociada a C. difficile (CDAD) es contraída principal-
mente por pacientes hospitalizados.
liberan esporas en la materia fecal, que pueden sobrevivir hasta cinco
meses en el medio ambiente. Las características clínicas y
patológicas de la CDAD no pueden distinguirse fácilmente de las de
otras enfermedades gastrointestinales, como la colitis ulcerativa,
enfermedad intestinal inflamatoria crónica y enfermedad de Crohn.
La infección por C. difficile toxigénica es una enfermedad potencialmente
mortal. No obstante, si se la trata adecuadamente, puede reducirse
la tasa de mortalidad de pacientes. Por esta razón, es importante un
diagnóstico rápido que permita a los médicos iniciar una terapia
adecuada y tomar las medidas necesarias para controlar su propagación
nosocomial.
PRINCIPIO DEL ENSAYO
®
El ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A/B es un ensayo
inmunocromatográfico cualitativo que detecta la toxina A y la toxina B
de C. difficile en muestras de materia fecal o cultivos de C. difficile
toxigénico. Para realizar el ensayo, primero se diluye una muestra
con diluyente de muestra para solubilizar las toxinas. A continuación,
se mezcla una parte de la muestra diluida con un volumen de
Conjugado 1 (que contiene anticuerpos contra la toxina A y la toxina
B unidos a micropartículas de color), más un volumen de Conjugado
2 (que contiene anticuerpos biotinilados contra la toxina A y la toxina
B). Se transfiere una parte de esta mezcla a un dispositivo de ensayo
con estreptavidina inmovilizada como línea de ensayo y anticuerpo
antiinmunogobulina de cabra como línea de control. Los inmuno-
complejos de toxina y anticuerpos conjugados forman una banda
visible al circular por la línea de ensayo. El exceso de conjugados de
partículas de color forma una banda visible en la línea de control, lo
cual significa que el ensayo está funcionando correctamente.
1
La reducción en la flora
levemente citopática pero
2-7
8,9
Las personas con CDAD
ALMACENAMIENTO
Guarde los dispositivos de ensayo en bolsitas de papel de aluminio
selladas a 2-30°C (a temperatura ambiente o refrigerados). Guarde
todos los frascos de reactivos del kit y los viales a 2-8°C. No congelar
ni sobrecalentar. Dejar estabilizar los componentes a temperatura
ambiente antes de su uso. Mezcle los reactivos suavemente en el
frasco antes de utilizarlos. Los reactivos no utilizados se deben
volver a guardar en el refrigerador después de su uso.
PRECAUCIONES
1. Para uso diagnóstico in vitro .
2. Se deben tomar las precauciones habituales contra los riesgos
microbiológicos esterilizando de forma adecuada las muestras,
recipientes y dispositivos de ensayo después de su uso.
Consulte las referencias
10
necesario.
3. Se deben leer y seguir atentamente las instrucciones.
4. Los reactivos se suministran a la concentración de trabajo
necesaria y deben aplicarse directamente desde los frascos
cuentagotas. No diluir.
5. No intercambie los reactivos entre kits con diferentes números
de lote.
6. No utilice los reactivos después de la fecha de caducidad
impresa en el envase.
7. La contaminación microbiana de los reactivos puede reducir la
exactitud del ensayo.
OBTENCIÓN, ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS
Las muestras de materia fecal deben recogerse en recipientes limpios
con cierre hermético.

Las muestras frescas sin tratar deben guardarse a 2-8°C y utilizarse
antes de las 72 horas. Si las muestras frescas no se pueden
analizar dentro de las 72 horas, deben congelarse a -20°C o a
una temperatura inferior en un congelador sin dispositivo
antiescarcha y analizarse dentro de los 2 meses. Evite congelar
y descongelar varias veces.

Las muestras frescas diluidas en el diluyente de muestra
suministrado en el kit pueden conservarse refrigeradas hasta 24
horas antes del ensayo.

Las muestras de materia fecal recogidas en medio de transporte
de Cary Blair con indicador (o equivalente) pueden guardarse
refrigeradas (2-8°C) o a temperatura ambiente (20-25°C) y
deben utilizarse dentro de los 5 meses a partir de su obtención.

Las muestras de materia fecal concentradas o recogidas en
formol, SAF, PVA no son adecuadas para este ensayo.
REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS
1. Dispositivos de ensayo (20 / 40): cada bolsita de papel de
aluminio contiene un dispositivo de ensayo para un solo uso con
desecante; la membrana es rayada con reactivos de captura
2. Reactivo conjugado 1 (3,6 ml x 1) / (3,6 ml x 2): micropartículas
de color azul negro recubiertas con antitoxina A de ratón y anti-
toxina B de conejo con ProClin
<0,1%
3. Reactivo conjugado 2 (3,0 ml x 1) / (3,0 ml x 2): antitoxina A
de cabra biotilinada y antitoxina B de conejo con ProClin
0,03% y azida sódica al <0,1%
4. Diluyente de muestra (12,0 ml x 1) / (12,0 ml x 2): solución
tamponada con ProClin
5. Control positivo (2,0 ml x 1) / (2,0 ml x 2): sobrenadante de
cultivo con toxina A y B de C. difficile con 0.05% ProClin
6. Control negativo (2,0 ml x 1) / (22,0 ml x 2): solución
tamponada con ProClin
7. Pipetas de transferencia desechables (40 / 80): pipetas con
marcas graduadas cada 0,1 ml
8. Tubos de dilución (40 / 80): tubos para la preparación de
muestras con marca de volumen de 0,5 ml
9. Varillas aplicadoras de madera (20 / 40)
10. Instrucciones de uso (IFU)
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correspondientes cuando
20 / 40 ensayos
®
300 al 0,05% y azida sódica al
®
300 al 0,05% y azida sódica al <0,1%
®
300 al 0,05% y azida sódica al <0,1%
sea
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300 al
®
300