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7.2
Solución de problemas de electrotransferencia
Transferencia incompleta
Problema
Áreas en blanco en la
membrana
No migran moléculas del gel
miniVE Instrucciones de funcionamiento 29281778 AB
7.2 Solución de problemas de electrotransferencia
Solución
Elimine todas las bolsas de aire atrapado en el
conjunto de la pila de transferencia:
Monte la pila mientras esté sumergida en solu-
ción buffer de transferencia, presione con deli-
cadeza cada esponja conforme la añada a la pila
y pase rodando un tubo de ensayo o una pipeta
de vidrio por la membrana y el gel suavemente
para eliminar todas las burbujas de aire.
Utilice solución buffer con baja fuerza iónica.
Compruebe la continuidad de los electrodos.
Durante la transferencia se libera una corriente
continua de gas en toda la longitud de los elec-
trodos. Si no se forman burbujas en toda la
longitud de un electrodo, cámbielo.
Aumente la intensidad del campo.
Aumente el tiempo de transferencia. Pruebe
duplicándolo.
No utilice agentes de fijación o tinción en el gel
antes de la transferencia.
Utilice un gel menos denso.
Reduzca la concentración de acrilamida del gel.
Compruebe que el pH de la solución buffer se
acerca al pH previsto. La mayoría de las solu-
ciones buffer no se deben titular; prepare solu-
ción buffer nueva.
Para las proteínas, utilice 3,5 mM de SDS (0.1 %)
en la solución buffer de transferencia.
Evite incluir metanol en la solución buffer de
transferencia o reduzca la cantidad al mínimo
absoluto.
Aumente el tiempo de despurinización de las
transferencias de Southern.
7 Solución de problemas
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