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Apéndice B
Validación de un nuevo ensayo
Controles
Todos los nuevos ensayos deben ser validados por el
usuario. Utilice una muestra de ADN de referencia cuando
pruebe un nuevo ensayo y asegúrese de que se utilizan los
parámetros de análisis adecuados en el software PyroMark
Q24 MDx. Las interacciones entre los cebadores o los bucles
formados en el ADN monocatenario pueden servir como
sitios de cebado para la incorporación de bases por la ADN
polimerasa. Se deben incluir los controles siguientes cuando
se analice por primera vez un ensayo:
Los pirogramas procedentes de estos controles no deben
mostrar ningún pico significativo tras la adición de
nucleótidos.
B-8
PCR sin molde de ADN. Este método permite comprobar
si los cebadores interaccionan para proporcionar una
señal de fondo en las reacciones de pirosecuanciación.
PCR con molde de ADN pero sin cebador se
secuenciación. Este método permite comprobar si el
molde puede realizar un bucle invertido sobre sí mismo
y proporcionar una señal de fondo en las reacciones de
pirosecuenciación.
Cebador de secuenciación sin ningún producto de la
PCR. Este método permite comprobar si el cebador de
secuenciación puede formar dobles hélices u horquillas y
proporcionar una señal de fondo en las reacciones de
pirosecuenciación.
Cebador biotinilado sin ningún producto de la PCR. Este
método permite comprobar si el cebador biotinilado
puede formar dobles hélices o horquillas y proporcionar
una señal de fondo en las reacciones de
pirosecuenciación.
Cebador de secuenciación y cebador biotinilado sin
producto de la PCR. Este método permite comprobar si
el cebador de secuenciación y el cebador biotinilado
pueden formar dobles hélices y proporcionar una señal
de fondo en las reacciones de pirosecuenciación.
Manual de usuario del PyroMark Q24 MDx 01/2016
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