2.0 INTRODUCCIÓN A LA MICROSCOPÍA CON ACEITE DE INMERSIÓN
Figura 1, aceite de inmersión y apertura numérica (A.N.)
El principio de inmersión en aceite se demuestra en la Figura 1 donde los rayos de luz individuales
se trazan a través de la muestra y, o bien pasan hacia el objetivo o se refractan en otras direcciones.
La Figura 1 ( a) ilustra el caso de un objetivo en seco con cinco rayos ( etiquetados 1 a 5 ) aparecen
pasando a través de una muestra con cubre-objetos sólo los dos rayos más cercanos al eje óptico
( rayos 1 y 2 ) del microscopio tienen el ángulo apropiado para entrar en la lente frontal del objetivo
. El tercer rayo se refracta en un ángulo de aproximadamente 30 grados al cubre-objetos y no entra
en el objetivo . Los dos últimos rayos ( 4 y 5 ) se reflejan internamente de vuelta a través del cubre-
objetos y , junto con el tercer rayo , contribuyen a las reflexiones internas de la luz en las superficies
de vidrio y tienden a degradar la imagen. Cuando el aire se sustituye por el aceite del mismo índice
de refracción que el vidrio , tal y como se muestra en la Figura 1 ( b ) , los rayos de luz ahora pasan
directamente a través del cubre-objeto, y no hay refracción. La apertura numérica es incrementada
en el factor de n= el índice de refracción del aceite.
Los objetivos diseñados para trabajar con aceite de inmersión tienen más ventajas que los objeti-
vos en seco. Los de inmersión són típicamente de corrección más elevada (ya sean de fluorita o
apocromático) y pueden trabajar con aperturas numéricas de hasta 1,40 A.N. cuando la dispersión
y viscosidad del aceite son adecuados. Estos objetivos permiten abrir en mayor grado el diafragma
del condensador, extendiéndo así la iluminación a través de la muestra y aprovecharse de una ma-
yor apertura numérica.
Un factor que normalmente se pasa por alto cuando se utiliza objetivos de inmersión en aceite y
por lo tanto de una mayor apertura numérica son las limitaciones impuestas al sistema por la lente
condensadora. En una situación en la que un objetivo de aceite de A.N. = 1,40 se está utilizando un
condensador con la apertura numérica más pequeña (por ejemplo de A.N. = 1,0), la apertura numé-
rica del condensador prevalece sobre la del objetivo y la A.N. total está limitada a 1,0.
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