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Resumen de contenidos para Qiagen QIAamp DSP Virus Spin Kit
- Página 1 Enero 2021 Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit ® Versión 1 Para uso en diagnóstico in vitro 61704 QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, D-40724 Hilden Tfno.: +49-2103-29-0 1122785ES Sample to Insight__...
- Página 2 Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Ki 01/2021...
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Página 3: Tabla De Contenido
Protocolo: purificación de ácidos nucleicos víricos de plasma o suero mediante una microcentrifugadora o los instrumentos QIAcube/QIAcube Connect MDx ..27 Control de calidad ....................31 Limitaciones ......................31 Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit 01/2021... - Página 4 Símbolos ......................... 32 Información de contacto .................... 34 Apéndice ......................... 35 Información para pedidos..................38 Historial de revisiones del documento ................. 40 Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Ki 01/2021...
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Página 5: Uso Previsto
Uso previsto El QIAamp DSP Virus Spin Kit es un sistema que utiliza la tecnología de membrana de gel de sílice (tecnología QIAamp) para aislar y purificar los ácidos nucleicos víricos procedentes de muestras biológicas. El producto está concebido para que lo utilicen usuarios profesionales, como técnicos y médicos que hayan recibido formación en técnicas de biología molecular. -
Página 6: Descripción Y Procedimiento
ácidos nucleicos de forma automatizada. Pueden procesar hasta 12 muestras en una sola serie. Al automatizar el QIAamp DSP Virus Spin Kit en el QIAcube o en el QIAcube Connect MDx, el instrumento quizá procese menos de 50 muestras debido a volúmenes muertos, evaporación y consumo adicional de reactivos por el pipeteado automatizado. - Página 7 Figura 1. El QIAcube. Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit 01/2021...
- Página 8 Lisis con QIAGEN Protease Las muestras se lisan en condiciones altamente desnaturalizantes a temperaturas elevadas. La lisis se realiza en presencia de QIAGEN Protease y de Buffer AL, que garantizan conjuntamente la inactivación de las ARNasas. Adsorción sobre la membrana QIAamp MinElute Para optimizar la unión del ADN y ARN víricos a la membrana, se añade etanol a los lisados.
- Página 9 Por ejemplo, un volumen de tampón de elución de 20 µl producirá un eluido final de más de 15 µl. El volumen del eluido recuperado depende de la naturaleza de la muestra. Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit 01/2021...
- Página 10 Los ácidos nucleicos eluidos se recogen en tubos de elución (ET) de 1,5 ml (suministrados). Se recomienda almacenar el ADN o el ARN a una temperatura de –30 °C a –15 °C. Los valores obtenidos a partir de ácido nucleico vírico aislado de muestras biológicas son normalmente inferiores a 1 µg.
- Página 11 Procedimiento QIAamp DSP Virus Spin Muestra Lisis Unión Lavado (Buffer AW1, recomendado) Lavado (Buffer AW2) Lavado (etanol) Centrifugación en seco (use un tubo de recogida nuevo) Elución Ácido nucleico vírico puro Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit 01/2021...
- Página 12 ARN transportador El ARN transportador tiene dos funciones: en primer lugar, potencia la unión de los ácidos nucleicos víricos a la membrana QIAamp, especialmente si en la muestra hay pocas moléculas diana. En segundo lugar, la adición de grandes cantidades de ARN transportador reduce las posibilidades de degradación del ARN vírico en el caso poco frecuente de que las moléculas de ARNasa no se desnaturalicen por efecto de las sales caótropas y del detergente del Buffer AL.
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Página 13: Resumen Y Explicación
Resumen y explicación El QIAamp DSP Virus Spin Kit utiliza una tecnología sólidamente establecida para la purificación simultánea de ADN y ARN viral. El kit combina las propiedades de unión selectiva de una membrana de gel de sílice con volúmenes de elución flexibles de entre 20 y 150 µl. -
Página 14: Materiales Suministrados
Consulte el apartado “Preparación de reactivos y tampones” de la página 23. ‡ Al automatizar el QIAamp DSP Virus Spin Kit en el QIAcube o en el QIAcube Connect MDx, el instrumento quizá procese menos § de 50 muestras debido a volúmenes muertos, evaporación y consumo adicional de reactivos por el pipeteado automatizado. -
Página 15: Materiales Necesarios Pero No Suministrados
† Para garantizar el correcto procesamiento de las muestras durante los procedimientos con el QIAamp DSP Virus Spin Kit, se recomienda calibrar los instrumentos (p. ej., pipetas y bloques calefactores) según las recomendaciones de los fabricantes. Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit 01/2021... -
Página 16: Advertencias Y Precauciones
(Safety Data Sheets, SDS) correspondientes. Puede obtenerlas en línea en el práctico y compacto formato PDF en www.qiagen.com/safety, desde donde también podrá buscar, ver e imprimir las hojas de datos SDS de todos los kits y componentes de los kits QIAGEN. - Página 17 QIAGEN no ha analizado los residuos líquidos generados por los procedimientos QIAamp DSP Virus Spin para determinar si contienen material residual infeccioso. La contaminación del residuo líquido con materiales residuales infecciosos es muy improbable, pero no se puede descartar completamente. Por consiguiente, el residuo líquido debe considerarse como infeccioso, y manipularse y desecharse siguiendo las normas de seguridad aplicables.
- Página 18 QIAGEN Protease Contiene: subtilisina. ¡Peligro! Causa irritación leve de la piel. Provoca lesiones oculares graves. Puede provocar síntomas de alergia o asma o dificultades respiratorias en caso de inhalación. Evitar respirar el polvo/el humo/el gas/la niebla/los vapores/el aerosol. Eliminar el contenido/el recipiente en un centro de eliminación de residuos...
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Página 19: Almacenamiento Y Manipulación De Reactivos
Buffer AVE deben congelarse en cantidades iguales a una temperatura de –30 a –15 °C. La QIAGEN Protease (QP) liofilizada se puede conservar a temperatura ambiente hasta la fecha de caducidad del kit sin que su rendimiento se vea afectado. -
Página 20: Manipulación Y Almacenamiento De Material De Muestra
Manipulación y almacenamiento de material de muestra Una vez obtenido y centrifugado, el plasma o suero puede conservarse a 2–8 °C hasta seis horas. Para el almacenamiento a largo plazo, se recomienda congelarlo en alícuotas a una temperatura de –80 °C a –20 °C. Las muestras de plasma o suero congeladas no deben descongelarse más de una vez. -
Página 21: Procedimiento
QIAGEN o con su distribuidor local. Si se derrama algún líquido, consulte el apartado “Advertencias y precauciones” (de la página 16). No utilice los componentes dañados de los kits, ya que su rendimiento podría verse afectado. -
Página 22: Manipulación De Las Columnas Qiaamp Minelute
Manipulación de las columnas QIAamp MinElute Dada la sensibilidad de las tecnologías de amplificación de los ácidos nucleicos, cuando se manipulen las columnas QIAamp MinElute deben adoptarse las siguientes medidas de precaución con el fin de evitar una posible contaminación cruzada entre las preparaciones de muestras: Aplique la muestra o la solución con cuidado a la columna QIAamp MinElute. -
Página 23: Procesamiento De Las Columnas Qiaamp Minelute En Una Microcentrifugadora
Añada todo el contenido del vial de 4,4 ml de disolvente de proteasa (PS) al vial de QIAGEN Protease (QP) liofilizada y mézclelo bien. Para evitar la formación de espuma, mezcle invirtiendo el vial varias veces. Compruebe que la QIAGEN Protease (QP) se haya disuelto por completo. - Página 24 Una vez reconstituida en el disolvente de proteasa (PS), la QIAGEN Protease (QP) permanece estable un año si se conserva a 2-8 °C, pero solo hasta la fecha de caducidad del kit. Evite conservar la solución madre de QIAGEN Protease a temperatura ambiente durante largos períodos de tiempo.
- Página 25 Buffer AVE por mililitro de Buffer AL. El uso de menos de 5,6 µg de ARN transportador por muestra debe validarse para cada tipo de muestra y de ensayo anterógrado concreto. Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit 01/2021...
- Página 26 Buffer AW1* Añada 25 ml de etanol (96–100 %) al frasco que contiene 19 ml de Buffer AW1 concentrado, como se describe en el frasco. Marque la casilla de verificación de la etiqueta para indicar que se ha añadido etanol. Conserve el Buffer AW1 reconstituido a temperatura ambiente. El Buffer AW1 reconstituido es estable hasta un año si se conserva a temperatura ambiente, pero solo hasta la fecha de caducidad del kit.
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Página 27: Protocolo: Purificación De Ácidos Nucleicos Víricos De Plasma O Suero Mediante Una Microcentrifugadora O Los Instrumentos Qiacube/Qiacube Connect Mdx
Para el paso 4, ajuste un bloque calefactor a 56 °C ± 3 °C. Asegúrese de que el Buffer AW1, el Buffer AW2 y la QIAGEN Protease (QP) se hayan preparado según las instrucciones de las páginas 21-26. - Página 28 Nota: Para la selección del protocolo del QIAcube, consulte las hojas de protocolo (https://www.qiagen.com/us/qiacube/standard/search/). 1. Pipetee 25 µl de QIAGEN Protease en un tubo de lisis (LT). Lea el apartado “Preparación de reactivos y tampones” de la página 23, para obtener información sobre la resuspensión de la QIAGEN Protease (QP) en el...
- Página 29 Cierre la tapa y centrifugue a aproximadamente 6000 × g durante al menos 1 minuto. Deseche el tubo de lavado que contiene el filtrado. Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit 01/2021...
- Página 30 El arrastre de etanol hacia el eluido puede causar problemas en las aplicaciones anterógradas. Algunos rotores de centrifugadora pueden vibrar durante la deceleración y provocar que el líquido que contiene etanol entre en contacto con la columna QIAamp MinElute. También puede producirse el contacto del líquido con la columna QIAamp MinElute al retirar la columna QIAamp MinElute y el tubo de lavado del rotor.
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Página 31: Control De Calidad
En cumplimiento del sistema de gestión de calidad con certificación ISO de QIAGEN, cada lote del QIAamp DSP Virus Spin Kit se analiza con respecto a una serie de especificaciones predeterminadas para garantizar la uniformidad de la calidad de los productos. -
Página 32: Símbolos
Símbolos En las instrucciones de uso o en el embalaje y en el etiquetado, pueden aparecer los siguientes símbolos: Símbolo Definición del símbolo Contiene suficientes reactivos para <N> reacciones <N> Consultar las instrucciones de uso Fecha de caducidad Producto sanitario para diagnóstico in vitro Número de catálogo Nota importante Número de lote... - Página 33 Número mundial de artículo comercial Conduce a Número “R” es la revisión de las Instrucciones de uso y “n” es el número de revisión Mantener alejado de la luz solar Advertencia/precaución Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit 01/2021...
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Página 34: Información De Contacto
Información de contacto Para recibir asistencia técnica y solicitar más información, visite nuestro Centro de servicio técnico en www.qiagen.com/Support (para obtener la información de contacto, visite el sitio web www.qiagen.com). Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Ki 01/2021... -
Página 35: Apéndice
* Siempre que trabaje con productos químicos, utilice una bata de laboratorio, guantes desechables y gafas de protección adecuados. Para obtener más información, consulte las hojas de datos sobre seguridad (Safety Data Sheets, SDS) correspondientes, que puede solicitar al proveedor del producto. Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit 01/2021... - Página 36 Materiales de vidrio Antes de usarse, los materiales de vidrio deben tratarse para garantizar que están libres de ARNasa. Antes de usarse, los materiales de vidrio utilizados para trabajar con ARN deben limpiarse con detergente, enjuagarse meticulosamente y calentarse en el horno a una temperatura superior a 240 °C durante cuatro horas o más (si se prefiere, incluso durante toda la noche).
- Página 37 ARNasas contaminantes, dado que muchas fuentes de agua destilada no presentan actividad ARNasa. Las ARNasas no se eliminan de los tampones del QIAamp DSP Virus Spin Kit mediante un tratamiento con DEPC y, por consiguiente, estos no presentan ninguna contaminación por DEPC.
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Página 38: Información Para Pedidos
Información para pedidos Producto Contenido N.º de cat. Para 50 preparaciones: columnas de QIAamp DSP Virus Spin Kit (50) 61704 centrifugación QIAamp Mini, tampones, reactivos, tubos, equipos VacConnectors Productos relacionados Instrumento y garantía de 1 año para QIAcube Connect MDx*... - Página 39 Para obtener información actualizada sobre licencias y exenciones de responsabilidad específicas del producto, consulte el manual de uso o la guía del usuario del kit de QIAGEN correspondiente. Los manuales de uso y las guías del usuario de los kits de QIAGEN están disponibles en www.qiagen.com o pueden solicitarse a los servicios técnicos de QIAGEN o...
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Página 40: Historial De Revisiones Del Documento
Historial de revisiones del documento Revisión Descripción R7, 01/2021 Se han actualizado las siguientes secciones: “Purificación automatizada de ácidos nucleicos víricos en el QIAcube o el QIAcube Connect MDx”, “Materiales requeridos pero no suministrados”, “Advertencia y precauciones”, “Protocolo: purificación de ácidos nucleicos víricos de plasma o suero mediante una microcentrifugadora o los instrumentos QIAcube/QIAcube Connect MDx”, “Símbolos”... - Página 41 Algunos de estos protocolos adicionales han sido proporcionados por usuarios de QIAGEN para usuarios de QIAGEN. QIAGEN no ha probado ni optimizado estos protocolos en profundidad. Por ello, QIAGEN no los garantiza ni asegura que no infrinjan los derechos de terceros.
- Página 42 Pedidos www.qiagen.com/shop | Servicio técnico support.qiagen.com | Sitio web www.qiagen.com HB-0417-007 Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Ki 01/2021...