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Practicar con el Encapsulator trabajando con el recipiente de reacción
completo
Una vez conforme con la formación de perlas de Ca-alginato, realice pruebas con el recipiente de
reacción entero para simular las condiciones de trabajo estériles, pero utilizando solución de alginato
no estéril.
Las condiciones de trabajo estériles conllevan la dificultad adicional de que a menudo resulta impo-
sible modificar el contenido del recipiente de reacción esterilizado en el autoclave sin perder la
esterilidad, como una pieza olvidada o mal montada. Por lo tanto, es importante que el recipiente
de reacción se prepare correctamente antes de la esterilización. Siga la sección 5 para saber cómo
montar y esterilizar el recipiente de reacción. Si cambia algo, anótelo en un procedimiento distinto.
1. Prepare todos los reactivos de encapsulación necesarios (como por ejemplo, para la encapsula-
ción de células animales; consulte la sección 6.14).
Para este proceso:
Monte una botella de presión.
2. Tome el recipiente de reacción esterilizado en el autoclave y acóplelo a la unidad de control.
Compruebe si el tubo de silicona del puerto de drenaje de líquido de la placa base del reactor está
cerrado con una pinza. Asegúrese de que la válvula colectora de perlas del recipiente de reacción
esté cerrada, el agitador magnético esté debajo del reactor y la barra agitadora esté encima del
agitador magnético.
3. Meta la solución de polimerización de 500 mL en la botella de presión. Acople el tubo de silicona
al filtro de membrana de líquido.
Conecte la botella de presión a la salida de aire de la unidad de control. Encienda la unidad de
control. Fije la presión de aire a entre 0,3 y 0,7 bares (4 a 10 psi). Cuando se bombee la cantidad
de líquido deseada, libere la presión de aire.
NOTA
La cantidad de solución endurecedora debe ser de 8 a 10 veces mayor que el volumen de la mezcla
polimérica. La solución de polimerización debe alcanzar una altura de al menos 2 cm (aprox. ¾")
dentro del recipiente de reacción (como mínimo 200 mL).
4. Fije la frecuencia de vibración, la tensión electrostática y, si se usa la bomba con jeringa, la velo-
cidad de bombeo con los valores adecuados determinados anteriormente. Fije la velocidad del
agitador magnético para que quede un vértice visible.
5. Llene a una jeringa de 60 mL con solución de alginato/muestra y acóplela al Encapsulator. Active
el sistema de control de vibración y fije la frecuencia de vibración con los valores predetermi-
nados en la sección 6-9. Active la bomba con jeringa y fije la velocidad de bombeo tal y como se
ha determinado anteriormente. Apriete el botón "turbo" hasta que se forme un chorro de líquido
continuo. Active el sistema de dispersión electrostática. Si es necesario, ajuste la velocidad de
bombeo y/o la frecuencia para obtener una cadena de perlas clara debajo del capuchón colector.
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60 mL solución de alginato al 1,5 %
500 mL 100 mM de solución de polimerización CaCl
600 mL NaCl al 0,9 % + 10 mM de solución de lavado CaCl
Conecte la unidad de dispersión electrostática al cable rojo del recipiente de reac-
–
ción.
Mueva el capuchón colector del dispositivo de eliminación de perlas para situarlo
–
debajo de la boquilla.
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B-395 Pro Manual de instrucciones, versión E
6 Manejo
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