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Protocolo de encapsulación de membranas de alginato-PLL-alginato
La membrana de alginato-polilisina-alginato es un sistema de encapsulación de células animales bien
establecido que describieron por primera vez Lim y Sun
ampliamente probado.
Soluciones requeridas
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Para una encapsulación de 12 mL de mezcla de polímero y producto se necesita lo siguiente:
1
Lim F. and Sun A.M. 1980. Microencapsulated Islets as Bioartificial Pancreas. Science 210: p.908-910.
64
Solución de alginato
al 1,5 %:
Solución de polimerización:
Solución de PLL:
Tampón de lavado MOPS:
Solución de alginato
al 0,03 %:
Solución de
despolimerización:
•
12 mL Solución de alginato al 1,5 % (filtrada de forma estéril)
•
100 mL Solución de alginato al 0,03 % (no estéril)
•
225 mL Solución de polimerización (no estéril)
•
75 mL Solución de PLL (no estéril)
•
900 mL Tampón de lavado MOPS (no estéril)
•
200 mL Solución de despolimerización (no estéril)
. A continuación se describe un protocolo
1
Alginato de viscosidad baja al 1,5 % en tampón de lavado MOPS
Ajuste el pH a 7,0 a 25 °C
Filtración estéril a través de un filtro de 0,2 µm
10 mM de MOPS (ácido morfolinopropanosulfónico)
100 mM de CaCl
2
pH = 7,2 a 25 °C
Poli-L-lisina MG 15.000-30.000 al 0,05 % en tampón de lavado MOPS
10 mM de MOPS (ácido morfolinopropanosulfónico)
NaCl al 0,85 %
pH = 7,2 a 25 °C
2 mL de solución de alginato al 1,5 %.
+ 98 mL de tampón de lavado MOPS.
50 mM de Na
-citrato
3
NaCl al 0,45 %
10 mM de MOPS
pH = 7,2 a 25 °C
B-395 Pro Manual de instrucciones, versión E
6 Manejo
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