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Procedimiento de encapsulación para la inmovilización de
los microorganismos en las perlas de Ca-alginato
En esta sección, se describe un método sencillo pero bien establecido para inmovilizar los microor-
ganismos de las perlas de Ca-alginato. La estabilidad de estas perlas depende no sólo del tipo de
alginato usado, sino también de las futuras condiciones de cultivo. Los iones de Ca de la solución
endurecedora sustituyen a los iones de Na de las gotitas, lo que provoca el endurecimiento de las
perlas (esta reacción es reversible). Si se necesitan perlas más resistentes, ya que algunos medios de
cultivo contienen ingredientes que disuelven lentamente las perlas, los iones de Ca podrían reempla-
zarse por iones de Ba, que tienen una mayor afinidad con el alginato que los iones de Ca, y las perlas
de Ba-alginato serán más estables.
La esterilización de las soluciones de alginato se consigue mejor con la filtración de membrana estéril
(0,2 µm). La esterilización por calor tiende a degradar parcialmente el alginato y cambia impredecible-
mente la viscosidad y la capacidad de polimerización.
Para la encapsulación de células animales, se recomienda usar otro protocolo porque la estructura
tridimensional del Ca-alginato impide la formación de nuevas membranas celulares durante la división
celular. Para dividir las células, son más adecuadas las cápsulas. En la sección 6-14 se describe un
procedimiento para la producción de cápsulas de alginato-PLL.
1. Prepare todos los materiales necesarios tal y como se ha descrito en la sección 6-10; recipiente
de reacción, botella de presión, jeringa de 60 mL, matraces, cilindros graduados, etc. Esterilice en
el autoclave el recipiente de reacción.
2. Prepare todos los reactivos de encapsulación necesarios.
Para este proceso:
3. Encienda la unidad de control. Fije la frecuencia de vibración, la tensión electrostática y la velo-
cidad de bombeo con los valores adecuados determinados anteriormente.
4. Meta la solución de polimerización de 500 mL en la botella de presión y ciérrela. Acople el tubo
de silicona al filtro de membrana de líquido. Bombee la solución de polimerización al interior del
recipiente de reacción.
5. Desacople el tubo de silicona del filtro de la membrana y meta el recipiente de reacción en una
bolsa biológica.
6. Prepare 10 mL de suspensión de microorganismos concentrada. La suspensión no debe
contener cationes bivalentes ni trivalentes (p. ej.: Ca, Mg, Al, Fe) ni contenerlos a una concentra-
ción muy baja, para evitar reacciones de polimerización preliminares con el alginato. Seleccione
la concentración de microorganismos deseada de la forma que esté en la mezcla polimérica final
< 1.010 células/mL (para células animales < 107 células/mL). Mezcle cuidadosamente los 10 mL
de la suspensión de microorganismos con los 50 mL de solución de alginato estéril al 1,5 % para
reducir la formación de burbujas de aire.
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50 mL Solución de alginato al 1,5 %, grado de viscosidad bajo, filtrado de forma
estéril
500 mL 100 mM de solución de polimerización CaCl
600 mL NaCl al 0,9 % + 10 mM de solución de lavado) CaCl
(no estéril)
2
(no estéril)
2
B-395 Pro Manual de instrucciones, versión E
6 Manejo
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