DiaSorin PTH-MM II RIA Kit Manual De Instrucciones página 28

Printed For Final Review: 10/10/03
ECO Number: 27341
d. PTH-MM II-Kalibratoren (A-F)
100 µL PTH-MM II-Kalibrator
200 µL PTH-MM II-Antiserum
e. Qualitätskontrolle und unbekannte Seren
100 µL Serum
200 µL PTH-MM II-Antiserum
9.4 Die Röhrchen vorsichtig ohne Schaumbildung vortexen und 15 (± 5) Minuten
lang bei 20-25°C inkubieren.
9.5 200 µL I PTH-MM II zu allen Röhrchen hinzugeben.
125
9.6 Die Röhrchen vorsichtig ohne Schaumbildung vortexen und 2 Stunden
(± 15 Minuten) lang bei 2-8°C inkubieren (Kühlschrank oder Crash-Eis-Bad).
9.7 Den DAG-PPT-Komplex gründlich mischen; 500 µL zu allen Röhrchen außer
den Totalaktivität-Röhrchen hinzugeben.
9.8 Die Röhrchen vorsichtig ohne Schaumbildung vortexen und 15 (± 5) Minuten
lang bei 20-25°C inkubieren.
9.9 Die Röhrchen 20 Minuten lang mit mindestens 760 x g* bei 20-25°C
zentrifugieren.
9.10 Die Überstände durch höchstens 2 Minuten langes Umdrehen der Röhrchen
sofort aus allen Röhrchen außer den Totalaktivität-Röhrchen dekantieren.
Bevor die Röhrchen aufrecht gestellt werden, die Röhrchen auf Saugpapier
abtupfen, um alle eventuellen Tropfen von Überständen auf den Rändern zu
entfernen.
9.11 Mit einem Gammaszintillationszähler das Präzipitat jedes Röhrchens und der
Totalaktivität-Röhrchen eine ausreichende Zeit lang messen, um statistische
Genauigkeit zu erhalten (siehe Abschnitt über Ergebnisse bzw. "Grenzen des
Verfahrens").
10. ANMERKUNGEN ZUM VERFAHREN
10.1 Jedes Aliquot des Reagenzes in das untere Drittel des Teströhrchens
hinzugeben, damit sich die Reagenzien vollständig vermischen.
10.2 Die Einweg-Borosilikatglasröhrchen
nichtspezifische Bindungen ergeben.
10.3 Falls Sie es vorziehen, den Überstand vom Präzipitat abzusaugen, achten Sie
dabei sorgfältig darauf, das Präzipität nicht aufzurühren.
10.4 Um die konsistente Leistung eines Radioimmunoassays vollständig zu
überwachen, müssen möglicherweise weitere Faktoren überprüft werden.
DiaSorin empfiehlt, die folgenden Parameter regelmäßig zu überprüfen, um
eine konsistente Leistung des Kits sicherzustellen.
a. Gesamtzählung
b. Maximale Bindung
Durchschnittliche Zählungen pro Minute (CPM) des Nullkalibrator-
Röhrchens / Durchschnittliche CPM der Totalaktivität-Röhrchen.
c. Nichtspezifische Bindung
Durchschnittliche CPM des NSB-Röhrchens / Durchschnittliche CPM der
Totalaktivität-Röhrchen.
d. Steigung der Kalibratorkurve
Z. B. Überwachung der Suppressions-Punkte 80%, 50% und 20% der
Kalibratorkurve.
* g = (1118 × 10
10:45 AM
einiger
) (Radius in cm) (U/min)
-8 2
26
Hersteller können erhöhte