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4. Solución de problemas
problema
Transferencia incompleta
Á reas en blanco o se desmaya
en la membrana
L as moléculas no migran
fuera del gel
•
p14
solución
Quitar atrapadas burbujas de aire entre el gel y la
membrana durante el montaje de la pila.
Uso tampón con una fuerza iónica más baja.
Revise todas las conexiones eléctricas. Confirme que
l a corriente fluye a través de la pila de la transferencia.
Comprobar que el pH del tampón es cercano al pH
deseado. La mayoría de los tampones, no se debe
ajustar. Haga tampón nuevo.
Utilizar 3,5 mM de SDS (0,1%) en el tampón de
transferencia.
Añadir varias hojas más de tampón saturada de
papel secante a cada lado del emparedado de gel
de modo que más tampón está presente durante la
transferencia.
Aumentar el período de transferencia. Los fragmentos
grandes pueden requerir una hora adicional.
No utilice la tinción o la fijación de los agentes en el
gel antes de la transferencia.
Utilizar un gel más delgada.
Reducir la concentración de gel de acrilamida.
Si se utiliza una membrana de nitrocelulosa no, evitar
la inclusión de metanol en el tampón de transferencia
o reducir la cantidad al mínimo posible.
Utilizar sustancias de grado reactivo.
Aumentar la carga neta de la proteína mediante el uso
de un tampón de transferencia con un pH diferente.
Un pH más bajo (<6-7) aumenta la carga positiva
sobre las proteínas; un pH más alto (>6-7) aumenta
la carga negativa de las proteínas.
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