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¡Importante! Trate de colocar
el gel correctamente la prim-
era vez. Las proteínas pueden
comenzar a transferir de inme-
diato. Una vez que la transfer-
encia se inicia, moviendo el
gel distorsionar los resultados
o hacer que "las bandas de
sombra" en la mancha.
•
p20
Prepare la pila de la transferencia
Transferir la muestra tan pronto como sea posible
después de la electroforesis para minimizar la
difusión de la muestra dentro del gel. Transferen-
cia electroforética puede realizarse en un máximo
de cuatro mini-geles en un tiempo, si dos geles se
colocan en cada uno de dos módulos.
La pila de transferencia consiste en el gel y
la membrana, papel de filtro, y tres esponjas
de embalaje. El gel determina el tamaño de la
membrana y papel de filtro.
Para cada gel, corte de la membrana y dos piezas de
papel de filtro del mismo tamaño que el gel, pero no
mayor que 8,5 × 10,5 cm.
Equilibrar el gel en tampón de transferencia durante
10 minutos.
Equilibrio permite que el gel se hinche o reducir antes
de que haga contacto con la membrana de transferen-
cia y elimina el exceso de sales tampón y detergentes
del gel. Mayor equilibrio puede resultar en bandas
difusas.
Pre-húmedas las membranas de nitrocelulosa o nylon
en agua destilada, teniendo cuidado de no atrapar
burbujas de aire.
Sumergir un extremo de la membrana en el buffer y
lentamente se sumergen, permitiendo que se moje por
acción capilar.
Pre-húmedo PVDF o otras membranas hidrófobas en
metanol.
Después de pre-remojo, remojo todos los tipos de
membrana en tampón de transferencia durante
2-5 minutos.
Moje las dos piezas de papel de filtro en tampón de
transferencia.
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Solución de problemas
