Secante De Solución De Problemas - Hoefer SE300 miniVE Manual Del Usuario

Secante de solución de problemas
problema
Transferencia incompleta
Áreas en blanco en la membrana
Las moléculas
no migran fuera del gel
•
p24
solución
• Quite todas las burbujas de aire atrapadas en la pila
de la transferencia, teniendo cuidado especialmente
grande durante el montaje de la pila para evitar que
las burbujas de aire que se formen ya que cada capa
se coloca.
• Compruebe la continuidad de los electrodos.
• Utilice un pulidor de baja fuerza iónica.
• Aumentar la intensidad de campo.
• Aumentar el período de transferencia. (Trate de
duplicar la misma.)
• No exponer el gel a las manchas o la fijación de los
agentes antes de la transferencia.
• Utilizar un gel más delgada.
• Reducir la concentración de gel de acrilamida.
• Para las proteínas, utilizar 3,5 mM de SDS (0,1%)
en el tampón de transferencia.
• Disminuye el metanol en el tampón de transferencia
de proteínas o reducir la cantidad a un mínimo.
Típicamente 10% de metanol se requiere para la
buena unión a membranas de nitrocelulosa.
• Aumentar la longitud de los borrones de ADN
de tiempo se depurinado. Compruebe el pH. La
mayoría de los tampones, no se debe ajustar, hacer
tampón nuevo.
• Para geles nativos, aumentar la carga neta de
la proteína mediante el cambio a un tampón de
transferencia con un pH diferente. Un pH más
bajo (<6-7) aumenta la carga positiva sobre las
proteínas; un pH más alto (>6-7) aumenta la carga
negativa de las proteínas.