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Precaución: El bromuro de
etidio es un mutágeno conocido.
Siempre use guantes al
manipular.
Use gafas de seguridad UV y
proteger la piel cuando se utiliza
una lámpara de rayos UV.
Nota: Si no se añadió colorante
para el refrigerante, colocar
la base en un fondo oscuro
para ver los pozos con mayor
facilidad.
Nota: En el ajuste máximo de
la unidad comienza tan pronto
como el sobrecalentamiento de
la base refrigerada alcance la
temperatura ambiente. Si no se
controla el sobrecalentamiento,
el gel se funde y/o la base de la
unidad se deforme!
La ejecución de electroforesis
Consulte las notas, tampones, y la sección de volúme-
nes para obtener información adicional.
Enfríe la base antes de su uso, especialmente cuando
los ajustes más altos de tensión se utilizarán o cuando
la separación se requieren más de 30 minutos.
Nota: Para controlar el progreso de separación, o bien
añadir 0,5 µg/ml (concentración final.) De bromuro de
etidio para el funcionamiento de amortiguación ahora,
o añadir 50 µg/ml (concentración final). Bromuro de
etidio a la muestra de amortiguación. Para visualizar
el progreso, apague la fuente de alimentación, retire
el conjunto de la tapa, y mantener una lámpara UV
portátil cerca del gel.
Adición de bromuro de etidio para el funcionamiento
de amortiguación o de la muestra disminuye la migra-
ción ligeramente. La detección por este método no
es tan sensible como la tinción y visualización en un
transiluminador. (Vea la detección de ADN, en la p15.)
Llene las dos cámaras de amortiguación con el fun-
cionamiento de búfer hasta que es de ~1 mm de
profundidad sobre el gel. (Esto requiere aproximada-
mente 220 ml.)
Cargar las muestras. Añadir muestra a tampón 5X
carga de la muestra y se mezcla (1/5 del volumen
final se tampón de carga, véase página 14). Utilizar
una micropipeta para cargar cada muestra, teniendo
cuidado de evitar la perforación de la parte inferior o
bien atrapar las burbujas.
Colocar la tapa de manera que el cátodo (–) del negro
se encuentra en el extremo más cercano a la muestra.
(Muestras de ácidos nucleicos migran hacia el ánodo
(+) de color rojo. Conecte los cables codificados por
colores (rojo con rojo y negro con negro) a una fuente
de alimentación aprobada, como el PS300B. Ajuste el
nivel de tensión y temporizador (si está disponible) de
acuerdo con el grado de resolución buscado.
p7
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