Publicidad
Nota: Con Coomassie Blue
es posible detectar 1 g de
proteína en una sola banda.
Con las manchas de plata más
sensibles, es posible detectar
tan poco como 10 ng de
proteína.
•
p16
8
Prepare la solución de monómero de apilamiento de
gel, vierta el gel de apilamiento, e introducir un peine
(con un ligero ángulo) en el sándwich, teniendo cuidado
de no atrapar el aire debajo de los dientes. Permita un
mínimo de 1 hora para que el gel se polimeriza.
Preparación de la muestra y carga
™
La muestra puede ser cargado ya sea mientras
el sandwich está en la máquina de colada o
después de la cámara de amortiguación superior
está unido. Al cargar las muestras durante el
uso de placas divisorias, las muestras deben
ser cargados sin la cámara de amortiguación
superior en su lugar.
La cantidad de muestra cargada depende del
espesor del gel, la sensibilidad del método de
detección utilizado, y la cantidad de muestra
se espera en cada banda. En un sistema
tampón continuo, la muestra de proteína debe
ser relativamente concentrada, porque no se
utiliza gel de apilamiento. En un sistema de
tampón discontinuo, la zona en la que cada
especie molecular migra se agudiza por el gel de
apilamiento, de modo que la muestra no necesita
ser tan concentrada.
1
Preparar los pozos
Quite el peine suavemente moviéndola de lado a lado
y luego levantándolo hacia arriba para evitar daños en
las paredes del pozo. Enjuagar cuidadosamente cada
pocillo con agua destilada para eliminar acrilamida no
polimerizada y luego drenar invirtiendo el emparedado
de gel (o lanzador). Llene cada pocillo con el tampón
de electroforesis.
Publicidad
