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¡Atención! Después de monitoreo
inicial, no deje la unidad sin
usar por más de 1 hora antes
de comprobar el progreso
de las bandas y el nivel de
amortiguación.
•
p24
Tiempo
Una ejecución es completa cuando el colorante
de rastreo alcanza la parte inferior del gel. En una
de 16 cm de gel (SE600), un 1,5 mm de espesor
Laemmli en gel de SDS, dirigido a 25 mA / gel sin
refrigeración, por lo general requiere de 5 horas. Más
largos geles requieren proporcionalmente más tiempo;
separaciones en geles de 24 cm (SE660) requieren
8 horas.
Parámetros de electroforesis para geles de ADN /
acrilamida
Geles de ADN normalmente son operados a un ajuste
de voltaje constante, y dado que los sistemas de
amortiguación son continuas, ambas lecturas de
corriente y tensión se mantienen constantes a lo
largo de la carrera. Condiciones de funcionamiento se
expresa en unidades de V / cm. Publicado condiciones
de funcionamiento varían ampliamente, pero
tensiones en el rango de 1 a 3 V / cm son comunes
para carreras durante la noche. En el SE600, hemos
llevado a cabo en geles de hasta 12,5 V / cm. (El
enfriamiento se requiere en este nivel de tensión.)
Registre cada carrera
Mantenga un registro de la configuración de
corriente o voltaje, el número y el grosor de los geles,
sistema de amortiguación, y las lecturas inicial y
final de corriente o voltaje para cada carrera para
que los resultados pueden ser comparados. Los
resultados inconsistentes para el mismo sistema y la
configuración de indicar posibles problemas como la
filtración de las concentraciones actuales de búfer
incorrecto, las altas concentraciones de sal, o la
calidad química inconsistente.
Comprobar el progreso de la banda después de
5 minutos, y de nuevo después de una hora,
manteniendo un ojo en la tasa de migración del
colorante de seguimiento. La carrera se completa
cuando el colorante de rastreo alcanza la parte
inferior del gel. Ver el nivel de amortiguación y, si es
necesario, reponer según sea necesario para mantener
el electrodo superior sumergido. (Un pequeño
volumen de tampón puede filtrarse pasado una placa
de muescas o junta, o tampón puede pasar a través
del gel.)
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