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Optimización del sistema LC Agilent 1290 Infinity
Cómo conseguir volúmenes de inyección más elevados
Cómo conseguir volúmenes de inyección más elevados
En la configuración estándar del inyector automático Agilent 1290 Infinity se
incluye un loop de muestra de volumen variable para hasta 20 µl inyecciones.
El dispositivo de medición puede inyectar un volumen máximo de 40 µl y el
cartucho de loop de muestra puede cambiarse para este fin (consulte el
manual del inyector automático 1290 Infinity para obtener información). El
volumen de retardo del sistema aumentará por lo tanto debido al inyector
automático.
Siempre que un método disminuya de una columna grande a una más peque-
ña, es importante que la conversión del método acepte la reducción del volu-
men de inyección en relación al volumen de la columna para mantener el
rendimiento del método. De este modo, el volumen de la inyección se manten-
drá al mismo porcentaje con respecto a la columna. Esto es particularmente
importante si el disolvente de la inyección es más fuerte (más eluotrópico) que
la fase móvil de inicio y cualquier aumento afectará la separación, especial-
mente de los primeros picos (factor de retención bajo). En algunos casos es la
causa de la distorsión de los picos y la norma general es mantener el mismo
disolvente de inyección o aplicar uno más suave que la composición del gra-
diente de inicio. Esto tiene que ver con si, o en qué medida, puede aumentarse
el volumen de inyección y el usuario debería buscar señales de aumento de
dispersión (picos más anchos o más torcidos y una resolución de pico redu-
cida) con el fin de aumentar el tamaño de la inyección. Si se realiza una inyec-
ción en un disolvente débil, el volumen podrá probablemente aumentar más ya
que el efecto será la concentración del analito en la cabeza de la columna al
inicio del gradiente. Por el contrario, si la inyección se encuentra en un disol-
vente más fuerte que la fase móvil de inicio, el volumen de inyección aumen-
tado esparcirá la banda del analito por la columna del gradiente, dando como
resultado la dispersión de los picos y la pérdida de la resolución.
Puede que la consideración principal para determinar el volumen de inyección
sea el diámetro de la columna, puesto que esto tendrá un gran impacto en la
dispersión de los picos. La altura de los picos puede ser superior en una
columna estrecha que con una inyección más larga en una columna más
ancha, ya que hay menos dispersión de picos. Con columnas de d.i. de 2,1 mm
los volúmenes habituales de inyección podrían ir de 5 a10 µl pero depende
bastante, como se comentaba anteriormente, de la química del analito y de la
fase móvil. Una guía aproximada para el volumen de inyección máximo puede
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Manual y guía de referencia rápida del sistema LC Agilent 1290 Infinity
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