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Optimización del sistema LC Agilent 1290 Infinity
Cómo conseguir una resolución más elevada
ha utilizado un sistema de desarrollo de método automatizado en la decisión
sobre las fases, es probable que se utilicen columnas cortas para un análisis
rápido en cada paso del reconocimiento.
La ecuación de la resolución muestra que el siguiente término más importante
es el recuento de placa o eficacia, N, y que éste puede optimizarse de distintas
maneras. N es inversamente proporcional al tamaño de la partícula y directa-
mente proporcional a la longitud de una columna y por lo tanto, una partícula
de menor tamaño y una columna más larga dará un número de placa superior.
La presión se eleva con el cuadrado inverso del tamaño de la partícula y pro-
porcionalmente con la longitud de la columna. Éste es el motivo de que el sis-
tema LC 1290 Infinity esté diseñado para trabajar a 1200 bar de manera que
pueda ejecutar partículas de subdosmicrones y la longitud de la columna
pueda aumentarse hasta 100 mm ó 150 mm. Hay incluso ejemplos de colum-
nas de 100 mm y 150 mm unidas para tener una longitud de 250 mm . La reso-
lución aumenta con la raíz cuadrada de N por lo que duplicar la longitud de la
columna aumentará la resolución en un factor de 1,4. Lo que se puede conse-
guir depende de la viscosidad de la fase móvil ya que esto está directamente
relacionado con la presión. Las mezclas de metanol generarán más retropre-
sión que las mezclas de acetonitrilo. El acetonitrilo es preferible a menudo
porque las formas de los picos son mejores y más estrechas sumado a la visco-
sidad más baja aunque el metanol generalmente permite una selectividad
mejor (definitivamente para moléculas pequeñas inferiores a 500 Da). La vis-
cosidad puede reducirse incrementando la temperatura pero debería recor-
darse que esto puede cambiar la selectividad de la separación. El experimento
mostrará si esto supone un incremento o descenso de la selectividad. A
medida que aumenta el flujo y la presión, debería tenerse en cuenta que el
calor por fricción del interior de la columna aumentará y que ello puede cau-
sar una mayor dispersión y posiblemente un pequeño cambio en la selectivi-
dad; ambos podrían verse como una reducción de la resolución. El último caso
podría compensarse reduciendo la temperatura del termostato en varios gra-
dos y de nuevo el experimento revelará la respuesta.
La curva van Deemter muestra que la velocidad de flujo óptima a través de
una columna STM es superior para las partículas más grandes y es bastante
plana a medida que aumenta la velocidad de flujo. Generalmente, las velocida-
des casi óptimas para las columnas STM son: 2 ml/min para columnas de
4,6 mm de d.i.; y 0,4 ml/min para columnas de 2,1 mm de d.i.
En separaciones isocráticas, aumentar el factor de retención, k, da como resul-
tado una mejor resolución porque el soluto se retiene durante más tiempo. En
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Manual y guía de referencia rápida del sistema LC Agilent 1290 Infinity
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