Agilent Technologies LC Agilent 1290 Infinity Manual Y Guía De Referencia Rápida página 64

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Optimización del sistema LC Agilent 1290 Infinity
Cómo conseguir una sensibilidad más elevada
situarse cerca de la anchura de banda natural a media altura de la banda de
absorción en el espectro UV. En el ejemplo del ácido anísico, es 30 nm.
La longitud de onda analítica suele fijarse generalmente en un máximo de la
longitud de onda para aumentar la sensibilidad correspondiente a dicha molé-
cula. El detector es lineal hasta 2 AU y más allá en el caso de muchas aplica-
ciones. Esto ofrece un rango lineal amplio para la concentración. En los
análisis de concentración elevada, el rango de concentración lineal puede
ampliarse si se fija una longitud de onda con una baja absorbancia como un
mínimo de la longitud de onda o se utiliza una anchura de banda más amplia,
lo que generalmente incluye valores de absorbancia más bajos. La utilización
de mínimos y máximos de la longitud de onda para la cuantificación se
remonta a los detectores UV convencionales, los cuales necesitaban evitar
pendientes acusadas en el espectro debido a las tolerancias mecánicas que se
generaban al mover las redes de difracción. Los detectores basados en diodos
no presentan esta limitación. Sin embargo, por convención, se escogen los
máximos y mínimos con preferencia a otras partes del espectro.
La anchura de banda de referencia se suele establecer en una región del espec-
tro UV en la que el analito no tenga absorbancia. Esto se ilustra en el espectro
del ácido anísico que se muestra en la
es típico de muchas moléculas pequeñas que contienen un cromóforo UV. Para
obtener los mejores resultados, se ha fijado la referencia en una banda amplia
lo más próxima posible a la longitud de onda de la señal, pero en una región
con absorbancia cero. Se suelen utilizar anchuras de banda de referencia de
entre 60 nm y 100 nm. La referencia predeterminada es 360 nm con una
anchura de banda de 100 nm. Se utiliza una anchura de banda amplia porque
se reduce el ruido de la señal de referencia (según la teoría estadística, el
error, es decir, el ruido en este caso, se reduce por la raíz cuadrada del número
de determinaciones). Es importante que la anchura de banda de referencia no
se amplíe a una parte del espectro que tenga absorbancia, ya que entonces se
reduciría la señal resultante, así como la sensibilidad. La utilización de una
longitud de onda de referencia puede ayudar a reducir la deriva o la desvia-
ción en el cromatograma que se originan como consecuencia de los cambios en
el índice de refracción. Estos cambios se deben a la fluctuación de la tempera-
tura ambiente o a la operación de gradiente. Es posible probar fácilmente el
efecto de una señal de referencia. Para ello, es necesario configurar dos seña-
les idénticas, una con una señal de referencia y otra sin una señal de referen-
cia. Si ninguna parte del espectro presenta absorbancia cero, convendría
apagar la señal de referencia.
64 Manual y guía de referencia rápida del sistema LC Agilent 1290 Infinity
Figura 23 en la página 65. Este espectro