Agilent Technologies 1290 Infinity Manual De Usuario página 78

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Cómo optimizar el rendimiento del módulo
Cómo conseguir una resolución más alta
decisión de las fases, es probable que se utilicen columnas cortas para un aná-
lisis rápido en cada paso de la exploración.
La ecuación de resolución muestra que el recuento de placas o eficiencia (N)
constituye el segundo elemento más importante. Este elemento se puede opti-
mizar de diferentes maneras. N es inversamente proporcional al tamaño de las
partículas y directamente proporcional a la longitud de una columna; por lo
tanto, un tamaño más pequeño de las partículas y una columna más larga
darán lugar a un número de placas más elevado. La presión aumenta con el
inverso del cuadrado del tamaño de las partículas y, de una manera proporcio-
nal, con la longitud de la columna. Esta es la razón por la que el sistema LC
Agilent 1290 Infinity se ha diseñado para funcionar a 1200 bar. De esta forma,
puede analizar partículas inferiores a 2 µm y la longitud de la columna puede
aumentar en 100 mm o 150 mm. Existen incluso ejemplos de columnas de
100 mm y 150 mm que se han enlazado para obtener una longitud de 250 mm.
La resolución aumenta con la raíz cuadrada de N; por lo tanto, si la longitud
de la columna se dobla, la resolución aumentará en un factor de 1,4. El resul-
tado obtenido depende de la viscosidad de la fase móvil, ya que está directa-
mente relacionado con la presión. Las mezclas de metanol generarán una
retropresión mayor que las mezclas de acetonitrilo. A menudo se prefiere el
acetonitrilo, ya que las formas de los picos son mejores y más estrechas, ade-
más de contar con una baja viscosidad; no obstante, el metanol produce, por lo
general, una selectividad mejor (sin duda en el caso de moléculas pequeñas de
menos de, aproximadamente, 500 Da). Se puede reducir la viscosidad si se
aumenta la temperatura, pero se debe tener en cuenta que este aumento
puede modificar la selectividad de la separación. El experimento mostrará si
esto causa un aumento o un descenso de la selectividad. A medida que el flujo
y la presión aumentan, se debe tener en cuenta que el calentamiento dentro de
la columna como consecuencia de la fricción aumentará. Como consecuencia,
se podría originar un ligero aumento en la dispersión, además de un pequeño
cambio en la selectividad (ambos efectos podrían considerarse como una
reducción en la resolución). La reducción de la temperatura del termostato en
unos pocos grados podría compensar este último efecto. De nuevo, los resulta-
dos se revelarían tras el experimento.
La curva de Van Deemter muestra que la velocidad de flujo óptima a través de
una columna inferior a dos micrones es mayor que en el caso de las partículas
más grandes y que es prácticamente plana a medida que la velocidad de flujo
aumenta. Por lo general, las velocidades de flujo más óptimas para las colum-
nas inferiores a dos micrones son: 2 ml/min para columnas con un diámetro
interno de 4,6 mm y 0,4 ml/min para columnas con un diámetro interno de
2,1 mm.
78 Manual de usuario de la bomba cuaternaria 1290 Infinity