Agilent Technologies 1290 Infinity Manual De Usuario página 79

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Cómo optimizar el rendimiento del módulo
Cómo conseguir una resolución más alta
En las separaciones isocráticas, el aumento del factor de retención (k) tiene
como resultado una mejor resolución, ya que se retiene el soluto durante un
periodo mayor. En las separaciones de gradiente, la retención se describe
*
mediante k en la siguiente ecuación:
donde:
*
• k
= valor k medio,
• t
= duración del gradiente (o segmento del gradiente) (min),
G
• F = flujo (ml/min),
• V
= volumen de retardo de la columna,
m
• %B = cambio en la fracción del disolvente B durante el gradiente,
• S = constante (alrededor de 4 o 5 en el caso de moléculas pequeñas).
Esto muestra que k y, en consecuencia, la resolución, pueden aumentar si se
tiene un gradiente menos pronunciado (un cambio de 2 a 5 %/min constituye
una referencia), una velocidad de flujo mayor y una columna de volumen
menor. Además, esta ecuación muestra cómo se puede acelerar un gradiente
existente: si se dobla el flujo, pero el tiempo del gradiente se reduce a la mitad,
*
k permanece constante y la separación presenta el mismo aspecto aunque
ocurra en la mitad de tiempo. Algunas investigaciones publicadas reciente-
mente han mostrado cómo, gracias a una ejecución más rápida, una columna
inferior a dos micrones más corta (a temperaturas superiores a 40 °C) puede
generar una capacidad de picos más elevada que una columna inferior a dos
micrones más larga. (Consulte Petersson et al., J.Sep.Sci, 31, 2346-2357, 2008,
Maximizing peak capacity and separation speed in liquid chromatogra-
phy).
Manual de usuario de la bomba cuaternaria 1290 Infinity 79