Tabla de contenido
Publicidad
Análisis de curvas de disociación de alta resolución
Antes de realizar un análisis HRM, la secuencia objetivo
se debe amplificar a un número elevado de copias.
Esto se realiza normalmente mediante PCR en
presencia de un colorante intercalante fluorescente
dsADN. El colorante no interacciona con el ssADN
pero se intercala activamente con el dsADN y emite
una fluorescencia intensa cuando se ha intercalado.
Los cambios en la fluorescencia se pueden utilizar
para medir el aumento de la concentración de ADN
durante la PCR y medir a continuación directamente
la disociación térmicamente inducida del ADN
mediante HRM. Durante el análisis HRM, la
fluorescencia es inicialmente alta porque la muestra
comienza en forma de dsADN. Según aumenta la
temperatura, la fluorescencia disminuye y el ADN se
disocia en cadenas sencillas. El comportamiento de
disociación observado es característico de una
muestra de ADN concreta.
Mediante el análisis HRM, el Rotor-Gene Q MDx puede
identificar las muestras según la longitud de las
secuencias, el contenido de GC o la
complementariedad de la secuencia de ADN. El
análisis HRM se puede utilizar en las aplicaciones de
genotipado, como p. ej. el análisis de
inserciones/deleciones o de polimorfismos de
nucleótido simple (PNS) o para localizar mutaciones
genéticas desconocidas. También se puede utilizar en
aplicaciones de epigenética para la detección y el
análisis del estado de metilación del ADN. Asimismo se
puede utilizar para detectar de forma cuantitativa
una pequeña proporción de ADN variante en el fondo
de una secuencia natural con sensibilidades
aproximadas al 5%. Esto se puede utilizar, por ejemplo,
para estudiar mutaciones somáticas adquiridas o
cambios en el estado de metilación de los islotes CpG.
El análisis HRM en el Rotor-Gene Q MDx permite
realizar un gran número de aplicaciones, incluyendo:
11-2
Identificación de genes candidatos de
predisposición
Manual del usuario Rotor-Gene Q MDx 09/2018
Publicidad
Tabla de contenido
