Microscopía De Campo Oscuro De Alto Aumento - Optika Italy B-510 Serie Manual De Instrucciones

12.3 Microscopía de campo oscuro de alto aumento
Para un trabajo más preciso y fondos más negros, puede elegir un condensador diseñado especialmente para campo os-
curo, es decir, para transmitir sólo los rayos oblicuos. Existen varias variedades: Condensadores de campo oscuro "seco"
con aire entre la parte superior del condensador y la parte inferior del portaobjetos, y condensadores de campo oscuro
de inmersión que requieren el uso de una gota de aceite de inmersión (algunos están diseñados para utilizar agua en su
lugar), estableciendo contacto entre la parte superior del condensador y la parte inferior del portamuestras. El condensador
de campo oscuro de inmersión tiene superficies internas espejadas y pasa rayos de gran oblicuidad y libre de aberraciones
cromáticas, produciendo los mejores resultados y el fondo más negro.
Quizás el condensador de campo oscuro más utilizado es el paraboloide, que consiste en una pieza sólida de vidrio recti-
ficado con gran precisión en la forma de un paraboloide.
Como se discutió anteriormente, el condensador de campo oscuro seco es útil para objetivos con aperturas numéricas por
debajo de 0.75, mientras que los condensadores de inmersión paraboloide y cardioide (Fig. 23) pueden ser usados con
objetivos de apertura numérica muy alta (hasta 1.4). Los objetivos con una apertura numérica superior a 1.2 requerirán
una cierta reducción de su apertura de trabajo, ya que su apertura numérica máxima puede exceder la apertura numérica
del condensador, permitiendo así que la luz directa entre en el objetivo. Por esta razón, muchos objetivos de alta apertura
numérica diseñados para su uso con iluminación de campo oscuro y de campo claro se realizan con un diafragma de iris
ajustable incorporado que actúa como un tope de apertura.
Esta reducción en la apertura numérica también limita el poder de resolución del objetivo así como la intensidad de la luz en
la imagen. Los objetivos especializados diseñados exclusivamente para el trabajo en campo oscuro se producen con una
apertura numérica máxima cercana al límite inferior de la apertura numérica del condensador de campo oscuro. No tienen
diafragmas internos de iris, sin embargo, los diámetros de la montura de la lente se ajustan de manera que al menos una
lente interna tenga el diámetro óptimo para que funcione como un tope de apertura.
El condensador cardioide es muy sensible a la alineación y debe colocarse cuidadosamente para aprovechar el cono muy
afilado de la iluminación, lo que lo convierte en el condensador de campo oscuro más difícil de usar. Además, el conden-
sador produce una cantidad significativa de resplandor, incluso a partir de las partículas de polvo más diminutas, y la corta
distancia focal puede resultar en una mala iluminación de objetos que superen unas pocas micras de tamaño o grosor. Al
elegir portaobjetos para la microscopía cuantitativa de campo oscuro de alto aumento, asegúrese de seleccionar portaob-
jetos hechos de una mezcla de vidrio que esté libre de impurezas fluorescentes.
Se debe prestar especial atención a los detalles de engrasar un condensador de alta apertura numérica en el fondo del
portamuestras. Es muy difícil evitar la introducción de pequeñas burbujas de aire en el área entre la lente superior del
condensador y el fondo del portaobjetos del microscopio, y esta técnica debe practicarse a la perfección. Las burbujas de
aire causarán destello y distorsión de la imagen, lo que provocará una pérdida de contraste y una degradación general de
la imagen.
También se encuentran problemas cuando se utilizan portaobjetos demasiado gruesos o demasiado delgados. Muchos
condensadores de campo oscuro contienen la gama de espesores de diapositivas utilizables inscritos directamente en el
soporte del condensador. Si el portaobjetos es demasiado grueso, a menudo es difícil enfocar el condensador sin recurrir a
un aceite de inmersión de mayor viscosidad. Por otro lado, los portaobjetos demasiado delgados tienden a romper la unión
de aceite entre el condensador y el portaobjetos. Es una buena idea comprar portaobjetos de precisión del grosor correcto
para evitar cualquiera de los problemas mencionados anteriormente.
Los condensadores de alta apertura numérica, ya sea para uso en seco o con aceite, deben estar centrados con precisión
en la trayectoria óptica del microscopio para lograr un rendimiento óptimo.
Para lograr esto, muchos condensadores de campo oscuro se construyen con un pequeño círculo grabado en la superficie
superior para ayudar a centrar el condensador. El centrado se realiza con un objetivo de baja potencia (10x-20x) mediante
imágenes del círculo grabado y utilizando los tornillos de centrado del condensador para asegurar que el círculo (y el con-
densador) estén correctamente centrados en la trayectoria óptica.
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