Agilent Technologies 1260 Infinity Manual De Usuario página 117

4 Evaluación de los espectros de fluorescencia
5 Encendido de la lámpara (únicamente para el análisis)
Para conseguir una reproducibilidad y linealidad máximas, cambie el ajuste de la lámpara
N O TA
para que permanezca siempre encendida (por defecto, se enciende únicamente durante el
análisis).
Se recomienda realizar una hora de calentamiento inicial del instrumento.
6 Evitar presiones excesivas en la celda de flujo del detector
Al comparar espectros de excitación de fluorescencia directamente con espectros de
N O TA
detectores de diodos o de absorbancia basados en referencias bibliográficas, deben
considerarse las grandes diferencias en la anchura de banda óptica utilizada (detector de
fluorescencia: 20 nm), que provocan una variación máxima sistemática de la longitud de
onda en función del espectro de absorbancia del compuesto a evaluar.
Manual de usuario del detector de fluorescencia Agilent 1260
los espectros de emisión (modo de emisión múltiple). Después, establezca la
longitud de onda de emisión determinada y realice un barrido de excitación
múltiple (modo de excitación múltiple) para encontrar la longitud de onda
óptima de excitación.
A diferencia de los detectores UV de diodos, donde los espectros UV se eva-
lúan tomando un espectro en el máximo del pico y seleccionando un espec-
tro de referencia en la línea base, los espectros de fluorescencia se obtienen
seleccionando un espectro en el máximo del pico y una referencia en torno
a los puntos de inflexión. La selección de espectros de referencia en la línea
base no resulta útil ya que el espectro en la línea base presenta mucho
ruido (ausencia de luz).
A menos que sea necesario conseguir una sensibilidad máxima, la vida útil
de la lámpara puede aumentarse significativamente si se enciende única-
mente para el análisis. A diferencia de otros detectores de LC, el detector
de fluorescencia se equilibra en segundos una vez encendida la lámpara.
Procure que la caída de presión no sea mayor de 20 bar tras la celda de flujo
si conecta dispositivos adicionales, como otros detectores o un colector de
fracción. Es mejor colocar un detector UV antes del detector de fluorescen-
cia.
Optimización del detector
Descripción general de la optimización
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