Agilent Technologies 1260 Infinity Manual De Usuario página 83

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Utilización del detector de fluorescencia
Desarrollo de métodos
Estas tareas han de repetirse para cada compuesto utilizando un espectrofotó-
metro de fluorescencia o usando condiciones de parada de flujo en la LC.
Generalmente, cada compuesto requiere un análisis independiente. Como
resultado, se obtiene un espectro de excitación y emisión (Figura 29 en la
página 80) para cada compuesto. Se trata de un procedimiento laborioso, por
lo que sólo resulta aplicable cuando exista un número limitado de compuestos
de interés.
El sistema LC Agilent Serie 1200 Infinity ofrece tres formas distintas de obte-
ner información completa sobre la fluorescencia de un compuesto:
Procedimiento I: Realizar un barrido de fluorescencia fuera de línea para un
único compuesto, según se ha descrito anteriormente para la fase móvil. Esto
debe hacerse preferiblemente con una cubeta manual del detector de fluores-
cencia cuando haya compuestos puros disponibles.
Procedimiento II: Realizar dos análisis de LC con el detector de fluorescencia
Agilent 1260 Infinity para separar la mezcla de compuestos bajo condiciones
conocidas y adquirir espectros de excitación y emisión por separado.
Procedimiento III: Utilizar una combinación de detector de fluorescencia y
detector de diodos Agilent Serie 1200 Infinity para adquirir espectros UV/visi-
bles (equivalentes a los espectros de excitación) con el detector de diodos y
espectros de emisión con el detector de fluorescencia en un único análisis.
Procedimiento I: Realización de un barrido de fluorescencia
Dado que, tradicionalmente, los espectros de fluorescencia no podían obte-
nerse fácilmente con los antiguos detectores de fluorescencia de LC, en el
pasado se utilizaron espectrofotómetros de fluorescencia estándar para adqui-
rir información espectral de compuestos desconocidos. Desafortunadamente,
esta estrategia limita la optimización, ya que es previsible que existan diferen-
cias entre el diseño óptico del detector de LC y el espectrofotómetro de fluo-
rescencia específico, o incluso entre detectores. Estas diferencias pueden
conducir a variaciones en las longitudes de onda óptimas de excitación y emi-
sión.
El detector de fluorescencia Agilent Serie 1260 ofrece un barrido de fluores-
cencia que suministra toda la información espectral previamente obtenida con
un espectrofotómetro de fluorescencia estándar, independientemente del
detector de fluorescencia de LC. La Figura 31 en la página 85 muestra la infor-
mación completa obtenida para la quinidina con el detector de fluorescencia
Agilent 1260 Infinity y una cubeta manual en una única medida fuera de línea.
Manual de usuario del detector de fluorescencia Agilent 1260 83