Agilent Technologies 1260 Infinity Manual De Usuario página 86

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Utilización del detector de fluorescencia
Desarrollo de métodos
Procedimiento II: Realización de dos análisis de LC con el detector de
fluorescencia
Las condiciones para la separación de compuestos orgánicos como hidrocar-
buros aromáticos policíclicos (HAP) se describen de forma adecuada en diver-
sos métodos estándar, incluidos los métodos EPA y DIN, comúnmente
utilizados. Para alcanzar unos niveles de detección óptimos deben buscarse las
longitudes de onda óptimas de excitación y emisión de todos los compuestos.
Sin embargo, la necesidad de realizar barridos de fluorescencia individuales
hace que resulte un proceso laborioso. Una estrategia más adecuada es adqui-
rir espectros en línea para todos los compuestos durante un análisis. Esto ace-
lera enormemente el desarrollo de los métodos. Dos análisis son suficientes
para la optimización.
Durante el primer análisis, se elige una longitud de onda del rango UV bajo
como longitud de onda de excitación y una longitud de onda de emisión del
rango espectral de longitudes de onda de emisión. La mayoría de los fluorófo-
ros muestran una fuerte absorción a estas longitudes de onda y un rendi-
miento cuántico elevado. La excitación resulta suficiente para recoger
espectros de emisión.
La
un único análisis de una mezcla de 15 HAP. Este conjunto de espectros se uti-
liza para configurar una tabla de tiempos con las longitudes de onda de emi-
sión óptimas de todos los compuestos.
Los espectros de compuestos individuales del gráfico de isofluorescencia
muestran que se necesitan al menos tres longitudes de onda de emisión para
detectar correctamente los 15 HAP.
Tabla 10
0 minutos:
8,2 minutos:
19,0 minutos:
En el segundo análisis, se introducen tres valores para las longitudes de onda
de emisión en el programa de tiempos y se registran los espectros de excita-
ción, tal como se muestra en la
dad elevada (color rojo) la genera la luz dispersa cuando los espectros de
emisión se solapan con la longitud de onda de excitación. Esto puede evitarse
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Tabla en la página 88 contiene todos los espectros de emisión obtenidos en
Tabla de tiempos para el análisis de PNA
350 nm
420 nm
500 nm
para naftaleno a fenantreno
para antraceno a benzo(g,h,i)perileno
para indeno(1,2,3-cd)pireno
Figura 33 en la página 89. El área de intensi-
Manual de usuario del detector de fluorescencia Agilent 1260