Búsqueda De Las Longitudes De Onda Óptimas - Agilent Technologies 1260 Infinity Manual De Usuario

Búsqueda de las longitudes de onda óptimas
Los parámetros más importantes a optimizar en la detección de fluorescencia
son las longitudes de onda de excitación y de emisión. Generalmente, se
asume que la longitud de onda óptima de excitación puede obtenerse a partir
del espectro de excitación adquirido en un espectrofluorímetro. También se
asume que, una vez encontrada la longitud de onda óptima de excitación para
un tipo de instrumento en particular, también puede aplicarse ésta a otros ins-
trumentos.
Ambas suposiciones son erróneas.
La longitud de onda óptima de excitación depende de la absorción de los com-
puestos, pero también de las características del instrumento (por ejemplo, del
tipo de lámpara y de las redes de difracción). Dado que la mayoría de las
moléculas orgánicas absorben mejor en el rango ultravioleta, el módulo se
diseñó para proporcionar una relación señal-ruido óptima en el rango del
espectro entre 210 nm y 360 nm. Para conseguir una sensibilidad máxima, la
longitud de onda de absorbancia de la molécula de muestra debe coincidir con
el rango de longitudes de onda del instrumento. En otras palabras, con una
longitud de onda de excitación del espectro ultravioleta. El módulo ofrece un
amplio rango de longitudes de onda de excitación, pero para conseguir una
sensibilidad mayor debe seleccionarse una longitud de onda del rango ultra-
violeta (cerca de 250 nm).
Los elementos que pueden provocar una reducción de la eficacia en el rango
ultravioleta bajo son la lámpara de flash de xenón y las redes de difracción.
Las lámparas de flash desplazan la longitud de onda óptima hacia rangos más
bajos, alcanzando un máximo de 250 nm. La red de difracción de excitación
está diseñada para ofrecer una eficacia máxima a 300 nm.
Manual de usuario del detector de fluorescencia Agilent 1260
Optimización del detector
Búsqueda de las longitudes de onda óptimas
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